产品说明:
经常规质粒制备方法制备的质粒DNA,通常含有高水平的内**(LPS,脂多糖)。如果制备的质粒用于转染内**敏感型细胞系,或者用于微注射,通常需要对纯化到的质粒进行内**去除操作,以降低内**水平。本公司生产的内**去除溶液,可以简单高效的对纯化到的质粒进行去除内**操作,经过一次处理,可以使内**水平降至0.1U/ug DNA,两次处理可使内**水平小于0.1 U/ug DNA。
保存条件和稳定性
自购买之日起,本试剂可在室温条件下(15℃~25℃)保存18个月。
重要提示
Ø 本试剂为红色溶液,较为粘稠,使用时,请用剪去枪头尖的枪头吸取。
Ø 实验前,请先将水浴锅调至65度。
内**去除操作步骤
1. 在制备好的质粒中加入0.1倍体积的Endoclean Buffer,如10 mL质粒中加入1mL EndoClean Buffer。
注意:如果起始的质粒量很少,为减少损失,可以适当的增加质粒的体积。
2. 颠倒充分混匀,冰上放置10分钟。
注意:低温下,溶液中内**将会被吸附,冰浴步骤非常重要,此时溶液将会变澄清。
3. 将混合物置于65度水浴中水浴5分钟,此时溶液将会变混浊,室温下,12,000 rpm离心5分钟,此时溶液将会分层。
注意:水浴后立即进行离心操作,高温将有利于溶液离心后分层,禁止低温离心操作;如果温度较低,离心后不分层,加入1/25 体积的氯仿,混匀后,再次进行离心操作。
4. 小心吸取上清,避免吸起下层液体,转移上清至一个新的离心管中,加入0.1 倍体积醋酸钠或醋酸钾(3M,PH 5.2)和0.7倍体积的异丙醇,沉淀质粒DNA。
5. 12,000rpm离心5分钟,吸去上清,加入1~5mL 70%的乙醇,12,000 rpm 离心5分钟,弃去上清液。
6. 瞬时离心,尽量吸干残留的上清液,空气干燥20分钟,或50烘箱中干燥10分钟,加入适当的无内毒水溶解质粒DNA。
经过一次处理的质粒DNA内**含量小于0.1U/ug DNA,如果想得到内**含量更小的质粒,请重复步骤1~6。
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