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- 产品名称：过滤法质粒中量提取试剂盒II
- 产品型号：PD1414-01
- 产品展商：Biomiga
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- 发布时间：2013-01-08
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简单介绍
过滤法质粒中量提取试剂盒II（Plasmid ezFilter midi kit II）在离心法质粒中量提取试剂盒基础上开发的快速过滤法提取试剂盒，采用特殊的过滤装置，直接过滤细胞裂解液，收集上清。可以在45分钟内从100 mL菌液中提取到高达450 µg高拷贝质粒DNA。
产品描述
过滤法质粒中量提取试剂盒II（Plasmid ezFilter midi kit II）可在50~100mL**培养液中纯化400μg高纯度质粒DNA。
过滤法质粒中量提取试剂盒II组分：
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Catalog #
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PD1414-01
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Preps
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10
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ezBindTM Columns
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10
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Filter syringe(25 mL)
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10
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Buffer A1
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55 mL
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Buffer B1
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55 mL
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Buffer C1
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70 mL
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Buffer KB
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50 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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5.5 mg(275 µL)
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Elution Buffer
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20 mL
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User Manual
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1
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保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
1、质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
2、转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。切勿直接取冻存在4℃的菌进行培养。
3、柱结合能力：450μg
过滤法质粒中量提取试剂盒II操作简明步骤：
1、取100 µL新鲜的菌液接种到15-80 mL (勿超过 100 mL)的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2、加入5 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4、加入6 mL Buffer C1, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5、将裂解液转移至过滤器中，放在一个50 mL的试管上静置10分钟。管中的白色絮状沉淀浮上来，对准50 mL的管向下压，使裂解液尽可能多的通过，有些裂解液可能会残留在沉淀中。注：静置10 分钟时RNase A将工作，排除RNA污染。
6、加入6 mL 100% 乙醇，立即混匀，需马上离心过DNA柱。
7、立即转移6.0 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
8、可选: 向DNA柱中加入4.0 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
9、向离心柱中加入5.0 mL 70% 乙醇，室温下>2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
10、将离心柱放回高速离心机中，室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
11、将离心柱转至一个新的15 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL**ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置1分钟，>2,500 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。若想提高得率，将15 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间，>2,500 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。
过滤法质粒中量提取试剂盒II操作流程：
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