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- 产品名称：无内**快速质粒小量提取试剂盒
- 产品型号：PD1220-02
- 产品展商：Biomiga
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- 发布时间：2018-07-10
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简单介绍
无内**快速质粒小量提取试剂盒（EndoFree plasmid ezFlow mini kit）处理3-5mL的菌液，可获得8-30ug的质粒DNA。
产品描述
无内**快速质粒小量提取试剂盒（EndoFree plasmid ezFlow mini kit）处理3-5mL的菌液，可获得8-30ug的质粒DNA。
无内**快速质粒小量提取试剂盒组分：
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Catalog Number
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PD1220-02
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Preps
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250
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ezBind Columns
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250
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Buffer A1
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70 mL
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Buffer B1
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70 mL
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Buffer N3
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20 mL
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Buffer KB
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135 mL
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Buffer RET
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135 mL
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DNA Wash Buffer*
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54 mL
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Endofree Elution Buffer
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30 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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7 mg(350 µL)
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User Manual
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1
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保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
1、质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
2、转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、切勿直接取冻存的菌进行培养。
操作简明步骤：
1、接种新鲜的单个菌落到3-5 mL的LB培养基 (含适量***)，37oC震荡培养14-16小时。
2、室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
3、加入250 µL Buffer A1 (确保已加入RNase A)，用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
4、加入 250 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
5、加入60 µL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
6、将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中仍有白色沉淀，可再次离心）。
7、定量吸取离心后的上清液至新的1.5 mL管中，加入1倍体积的Buffer RET, (如500 µL裂解液加入到500 µL的上清液)及250 µL的100% ethonal，用手用力甩3次以混匀。
8、将溶液700 µL转移至带有收集管的DNA柱中，室温下13,000 rpm 离心20秒，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。再重复此步骤至全部溶液转移至DNA柱中。
9、可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
10、向离心柱中加入500 µL DNA Wash Buffer(确保已加入无水乙醇)，室温下，13,000 rpm 离心20秒，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“10”。
11、将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
12、将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 µL(体积>50 µL)的EndoFree Elution Buffer，室温放置1分钟，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。将离心管中的洗脱液再次加到DNA柱的正中间，室温放置1分钟，13,000 rpm 离心1分钟，收集洗脱液到同一个离心管中。
操作流程：
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