PLC的分类有很多种,可以根据不同的基数进行分类。
1、根据流动相和固定相的极性,高效液相色谱可分为正相色谱和反相色谱。
正相高效液相色谱:柱中的固定相由硅胶、氧化铝等极性化合物组成。色谱运行时,非极性化合物首先被洗脱出来,因为样品中的极性化合物对固定相具有更强的亲和力,因此它们在色谱柱中的保留时间比非极性化合物长。许多物质可以通过正相色谱进行分析,但由于药 物、食品和其他生物制品大多是非极性的,因此它们在日常生活中的应用不如反相色谱广泛。
反相高效液相色谱:固定相由非极性化合物组成,如十八烷基硅烷、反相 C4 HPLC 色谱柱、C8、C18和其他有机化合物。流动相是极性的。因此,极性高的化合物首先被洗脱,极性低或没有极性的化合物Z后被洗脱。
HPLC主要分析药 物、食品、生化分子等物质,本质上都是极性物质(水溶性)。因此,反相高效液相色谱得到更广泛的应用。
2、根据分离原理的不同,高效液相色谱可分为以下六种。
亲和层析:主要利用样品与固定物之间的亲和性来实现分离。
离子交换色谱:基于固定相和流动相之间带电基团的可逆交换来实现分离。离子交换树脂用于分离含有带电离子的样品。对于阴离子,使用阴离子交换树脂;对于阳离子,使用阳离子交换树脂。主要用于分离酸性和碱性化合物。
离子对色谱:在反相色谱的流动相或固定相中加入离子对试剂,与样品中的可电离成分形成“反离子”。常用的离子配对剂是戊烷、己烷、庚烷或辛烷磺酸盐。
吸附色谱:利用不同吸附的原理,根据样品中各组分对固定相的亲和力不同进行分离。
尺寸排阻色谱:按分子大小的顺序分离样品中的组分。色谱柱采用软凝胶如琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等,也可采用烷基葡聚糖、聚苯乙烯等半刚性凝胶。
手性色谱:用于分离样品中的光学活性异构体。固定相是化学键合硅胶。常用于医学、生物学等领域。
3、根据分析目的不同,HPLC可分为分析液相色谱和制备液相色谱。
分析液相色谱法:主要利用检测器对混合物中的成分进行定性和定量分析。
制备液相色谱:主要是对混合物中的成分进行分离纯化。制备柱和进样体积大于分析柱。
4、众所周知,混合物的分离是通过流动相流过HPLC柱来完成的,流动相可以是单一溶剂也可以是混合溶剂,因此HPLC可分为等度洗脱和梯度洗脱。脱掉两种。
等度洗脱:只有一种溶剂,所有操作均在一种溶剂中进行。
梯度洗脱:流动相由两种或多种溶剂组成,它们的浓度比不断变化。