细胞培养是指在体外模拟内部环境(无菌、适宜的温度、pH值和一定的营养条件等),使其能够存活、生长、繁殖并保持其主要结构和功能的方法。细胞培养也称为细胞克隆技术,生物学中的通称是细胞培养技术。无论是整个生物工程技术还是生物克隆技术之一,细胞培养都是必不可少的过程,而细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以将一个细胞经过大量培养后转变为简单的单细胞或很少分化的多细胞。这是克隆技术不可缺少的部分,而细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中一项重要且常用的技术。通过细胞培养可以获得大量细胞,也可用于研究细胞信号转导、细胞合成代谢、细胞生长增殖等。 建立细胞培养实验室的基本要求: 1、细胞培养是一种无菌操作技术,工作环境和条件必须不受微生物污染,不受其他有害因素的影响。 2、细胞培养室及设计原则是防止微生物污染和有害因素,要求工作环境清洁、空气清新、干燥、无烟。 3、细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设置在室内,移动少,常规操作和封闭培养在一个房间内,是一个洁净室。 100,000 环境。擦洗消 毒工作位于洁净室外,防止物品污染洁净的室内环境。细胞洁净室需要空调系统,并在外部保持一定的正压。 4、解剖实验室主要用于器官和组织的分离,需要无菌手术台、解剖显微镜、各种手术器械等。 组织细胞培养室除了一般实验室的普通设备外,还有一些特殊需要的设备。基本上可以分为两类: 一、细��培养实验室常用的基本设备 1.显微镜:倒置显微镜-是组织细胞培养室必备的日常使用设备之一,便于掌握细胞蠕虫的生长情况及观察是否有污染等情况。 2. 培养箱:体外培养的细胞需要在恒温下存活,就像体内的细胞一样。大多数情况下,*佳温度为37°C,温差不应超过±0.5°C。细胞的温度升高。 2℃时不能耐受数小时,40℃以上很快就会死亡。因此需要可以控制温度的培养箱,如恒温培养箱和灵敏度更高的CO2培养箱。 3、干燥箱:细胞培养箱中使用的一些仪器和器具需要干燥后才能使用,玻璃器皿必须进行干热**。 4、净水装置:细胞培养对水质要求较高,细胞培养及与细胞培养工作相关的液体制备所用的水必须事先经过严格净化。细胞培养的各种培养基和试剂的配制应使用3次蒸馏水:即使是玻璃器皿的洗涤,蒸馏水也应使用2次以上。 5、冰箱:必须配备细胞培养室。 a、普通冰箱或冷冻保存培养基、生理盐水等培养物及组织标本的短期保存。 b、低温冰箱(-20°C)——用于存放需要低温保存生物活性和长期保存的制剂,如酶、血清等。 6.细胞冷冻储存:储存通常是液氮容器。根据使用需要,分为不同类型和多种规格。选购液氮容器时,要综合考虑容积、取用方便、液氮挥发(经济)三个因素。 7.离心机:进行细胞培养时,常规需要制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等,通常需要实验室离心机。一般4000rpm台式离心机可以常规配置。例如,低速离心机可用于细胞沉降。过大的离心力有时会导致细胞损伤。 8、天平:常用的扭力天平、精密天平和各种电子天平。 9、灭 菌器:一般为高压蒸汽灭 菌器。直接或间接接触细胞的物品需要消 毒。 10、过滤器:目前细胞培养工作中使用的培养液,包括合成培养液、血清、消化胰蛋白酶等,常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质,暴露在高温或辐射下是容易发生变性或功能丧失,所以上述液体大多经过过滤消 毒以去除**。目前常用的过滤器有玻璃过滤器和微孔过滤器,各种过滤器都有其原理和特点。
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