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荧光显微镜的基本操作及注意事项

一、基本操作步骤

        (1) 安装紫外线防护罩。
         (2)打开高压汞灯电源控制箱开关。本文来自检验条网
        (3) 插入遮光罩以中断光路。
         (4) 预热5-10分钟。
         (5) 将载有样品的载玻片放在载物台上。
         (6) 选择物镜（按先低倍，后高倍的顺序）。
         (7) 转动分光镜组件转盘，选择需要的分光镜组件：“O”为观察透射光； “WU”用于观察蓝色荧光（如DAP1）； “WB”用于观察绿色荧光（如FITC）； “WG”用于观察红色荧光（如TRITC）。
         (8) 使用阻塞滤光片（目前大多数阻塞滤光片都内置在荧光显微镜中）。
         (9) 通过粗细螺旋调节焦距。
         (10)打开连接显微镜的电脑，点击数字成像系统软件，采集数字图像。
二.注意事项
        (1)由于荧光观察所用的光源是高压汞灯，发出的光中含有紫外线，对人眼有害，所以必须加装紫外线防护罩。本文来自巡检区网
        (2)为延长水银灯的使用寿命，水银灯打开后不能立即关闭，以免水银蒸发不完全而损坏电极，一般需要15分钟才能关闭。
         (3)水银灯熄灭后，待完全冷却后再重新启动。否则，灯内的水银蒸气还没有恢复到液态，内阻极小。如果再次施加电压，会造成短路，导致汞灯爆炸。这不仅会损坏电器，更重要的是，汞蒸气会溢出，从而导致工作室受到污染。因此，关闭水银灯后，不能立即再次开启，必须至少等待 30 分钟。
         (4)高压水银灯工作时放出大量热量。因此工作环境温度不宜过高，必须有良好的散热条件。
         (5)汞灯的使用寿命约为200-300小时。电源控制箱上有一个时间累积计数器。用户需要记录累计小时数，当达到300小时时，需要更换新灯泡，否则亮度不够，影响观察。
        三、荧光显微镜标本制作特点及观察要求
        (1)幻灯片：幻灯片的厚度应该是0.在 8mm 到 1.2mm 之间，载玻片太厚，无法吸收更多的光，激发光难以聚集在标本上。载玻片必须光滑、厚度均匀且没有明显的自发荧光。有时使用石英玻璃载玻片。
         (2)盖板玻璃：盖板玻璃的厚度应在0.17mm左右，光滑、干净。为了增强激发光，也可以使用干涉盖玻片。这种特殊的盖板玻璃表面镀有几层物质（如氟化镁），对不同波长的光有不同的干涉作用，可以使荧光顺利通过和反射。激发光，这种反射的激发光激发样品中的荧光。
         (3) 标本：组织切片或其他标本不宜太厚，一般5-20pm。太厚的切片会导致大部分激发光在试样下部被消耗，而物镜直接观察到的试样上部不能被激发。切片折叠或杂质过多会影响荧光观察。
        (4)封固剂：封固剂必须无自发荧光，五色透明。添加防淬火剂后，用指甲油（实际使用中，指甲油密封效果很好，可以薄而均匀）将盖板玻璃密封在其周围，这样不仅可以防止盖板玻璃滑动，还能防止抗衰老。猝灭剂蒸发。在没有抗淬灭剂的情况下，也可以使用含30%甘油的PBS，或等量的甘油和0.5mol/L碳酸盐缓冲液（pH 9.0-9.5）的混合物封片。
        (5)镜片的清洁：油性镜片使用后，需要用无水乙醇或3：7酒精醚混合物擦拭镜片纸。
        (6)及时观察：染色后的标本要及时观察，因为时间长了荧光会逐渐减弱。如果将标本存放在 4°C 的聚乙烯塑料袋中，可以延迟荧光衰减时间。

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