高速离心机分离的几种方法

高速离心机分离的几种方法

        制备型超速离心机的几种分离方法：
         A、差速离心：逐次加大离心力，每次可使样品溶液中的部分成分沉降。
        差速离心是*常用的方法之一。在这种方法中，离心管*初充满均匀的样品溶液。以一定速度离心一定时间后，得到两部分：沉淀和上清液。
        通常**次离心会去除大部分不需要的大颗粒。此时，大部分所需成分保留在上清液中。然后将收集的上清液以更高的速度离心以沉积所需的颗粒。选择离心时间以使大部分不需要的较小颗粒保留在上清液中。所得沉淀和上清液可进一步离心直至达到所需的分离纯度。
        差速离心的特点是操作简单，但分离纯度不高。
         B、密度梯度离心：可同时分离样品中的几种或全部成分，分离度好。
         1) 费率分区法：
        根据样品中不同颗粒的大小和沉降速度（S）不同。一般步骤如下：
        用密度梯度溶液填充离心管，溶液的密度从离心管的顶部到底部逐渐增加（正梯度）。
        小心地将要分离的样品添加到密度梯度溶液的顶部。样品在梯度溶液表面形成负梯度。
        由于不同大小的颗粒在离心力的作用下以不同的速度在梯度中运动，离心后会形成几个独立的样品区。
        注意：样品颗粒的密度必须大于梯度中任意点的密度。在区域到达试管底部之前，必须停止离心过程。
         2）等密度（isopycnic）：
        根据颗粒密度的不同进行分离。在离心过程中，颗粒移动到与自身相同的密度以形成一个区域。
        选择密度样本，使梯度范围包括要分离的所有粒子的密度。样品可以在密度梯度液体颗粒之上或均匀分布在密度梯度中.离心后，样品颗粒达到平衡点。注意：平衡后粒子的分离完全由它们的密度决定，与时间无关。此时改变离心速度只能改变区域的相对位置。 2.密度梯度分析法
        1）梯度介质的性质和选择：
         A. 应具备的属性：
        梯度材料的选择原则是满足分离方法的基本要求。理想的密度材料标准应该是：
         · 得到的溶液密度应覆盖所需的密度范围。
         · 具有某些特性，如折射率，可从中确定其浓度。
         · 所得溶液粘度低。
         · 不损坏分离的样品。
         · 离心后易于去除。
         · 不干扰分离积分的分析。
         B、常用介质种类：
        表 1. 20°C 时常用梯度材料的密度
        B、梯度介质的应用范围：
        表 2 等密度梯度介质的应用
        +++非常好++好 +是--不适用
        表 3 蔗糖梯度溶液中各种大分子的近似密度
        (2)、梯度溶液制备：
        计算
        稀释（本文第 3 章第 1 部分）
         (3) 渐变形状
        梯度形状分为：线性、等速、阶梯、平坦和陡峭指数梯度。 （如下所示）
        梯度的形状对于分离的成功非常重要：
        *常用的是线性梯度，适用于蛋白质、酶、激 素、核糖体亚基和一些植物病毒的分离；等速型适用于脂类蛋白质和一些需要漂浮分离的样品；不连续梯度或阶梯梯度*适合分离全细胞、亚细胞级分以及纯化某些哺乳动物或昆虫病毒。等速梯度和长液柱提高了分离能力，适用于核糖体亚基、多核糖体和植物病毒的分离。
         B.梯度柱制备：
        梯度柱可用手工或梯度仪器制备
        半注法：
        为减少离心时间，或分离较少的样品，可采用半进样法：下半管放置梯度介质，中间加入样品，在其上铺上缓冲液或液体石蜡油。
         (4)、加样方法及加样量：
        将样品加入梯度液柱中，针尖与离心管成45-60°的夹角，将样品沿管壁缓慢流至液面，对于DNA等易碎样品，可用带孔的移液管应使用较大的孔径代替针头，以避免对样品产生剪切力。样品浓度为梯度柱*小密度的 1/10 (W/W)。
         (5)、转子的选择及作用：
         (6)、分离区的回收与检测
        离心后形成的区域样品基本上有四种回收方法：
        一个。穿刺方法\n 穿刺离心管底部，让梯度溶液滴出，在离心管顶部放置一个带有合适阀门的盖子，以控制滴落速度。
        湾。虹吸法：
        将毛细管轻轻插入管底，尽量防止梯度晃动，用微量泵逐渐滴下，收集到一定量的液滴或体积中。
         C。加压方式：
        高密度液体通过针管泵入梯度离心管底部，部分收集交换液。
         d。切割方法：
        使用专用切割刀切割所需区域。
       
        区域检测：
        所谓区域检测，其实就是对水平转子或角转子和垂直转子的离心管中分离物质的监测，通常只是简单的测量260或280mm处的吸光度来判断核酸的整体分布情况或梯度中的蛋白质通常被称为在线监测。
        如何正确维护您的离心机
        离心机的发展 离心机是分离样品的仪器，广泛应用于生物医学、石油化工、农业、食品卫生等领域。离心机自问世以来，经历了低速、调整、超速的变化，其进步主要体现在离心设备和离心技术上，两者相辅相成。从转速上看，台式离心机基本属于低速和高速离心机的范畴。通用台式离心机的发展已经模糊了低速、高速、微型和大容量。众多的转子为科研人员提供了广泛的应用，使其成为科研实验室的优选。
        离心机原理
        利用离心力，根据混合物中各组分沉降系数、质量、密度等的不同原理，将样品混合物中的液固颗粒或液液分离。
        离心机的分类
        离心机是实验室中非常常见的分离仪器。可分为低速离心机、高速离心机、超速离心机等。 离心机：转速在3500 r/min～50000 r/min之间
        超高速离心机：转速大于50000 r/min。
        按温度可分为冷冻离心机和常温离心机；
        按容量可分为微型离心机、大容量离心机、超大容量离心机；
        按外观可分为台式离心机、落地式离心机。
        使用规则
        使用离心机的首要任务是**，离心力的损失可能会造成很大的损害。因此，要注意离心管是否平衡，转速是否超过设定值，转子是否腐蚀。
        离心机看似简单易用，没有技术含量，但正确使用和维护还是很有必要的。一旦出现故障，就会造成实验延误，得不偿失。
         1、离心机处于预冷状态时，必须关闭离心机盖，将离心后取出的转子倒置在实验台上，使腔内剩余的水分干燥。此时，离心机盖打开。
         2、转子预冷时，转子盖可以放在离心机的平台上，也可以放在实验台上，切不可旋拧浮在转子上，因为一旦误启动转子，转子会损坏。盖子会飞出去导致事故！
         3、转子盖拧紧后，一定要用手指触摸转子与转子盖之间是否有间隙。如果有缝隙，请拧下并重新拧紧，直到确认没有缝隙后，再启动离心机。
         4、离心过程中，操作人员不得离开离心室。一旦出现异常情况，操作者不能关闭电源（POWER）并按STOP。预冷前填写离心机使用记录。
         5、不要使用劣质离心管，也不要使用老化、变形、破裂的离心管。
         6. 节假日和晚上，*后使用离心机的人员必须通过例行**检查方可离开。
         7、仪器使用过程中如出现机器故障，请在零件损坏时及时与厂家联系。
        使用注意
        实验室常用电动离心机。电动离心机转速快，注意**，特别是在离心机运行过程中，由于试管垫不平衡或老化，使离心机在工作时移动，使其从试验台上脱落，或玻璃碎片旋转离心管因盖子未盖上而震动破碎后飞起来。出，引发事故。因此，在使用离心机时，必须注意以下操作。
         (1) 离心机外壳底部应放置棉花或试管垫。
         (2)如果电动离心机有噪音或机体振动，应立即切断电源，立即排除故障。
         (3) 离心管必须对称放置在机壳内，防止机体振动。如果只有一个样品管，则应将另一个样品管更换为相同质量的水。
         (4) 启动离心机时，先盖好离心机的顶盖，再慢慢启动。
         (5) 分离后，先关闭离心机。离心机停止转动后，打开离心机盖取出样品。请勿使用外力使其停止移动。
         (6)离心时间一般为1-2分钟。在此期间，实验者不应离开去做其他事情。
        用电注意事项
        在企业或科研院所，已普遍使用转速在3000转左右的低速实验离心机，如315型过滤+沉降一体式实验离心机、100型实验离心机、200型实验离心机等。设计、重心低、**稳定，在化工、食品、医疗等领域的早期样品分析中得到了更广泛的应用。
        操作方法
        1、使用各种离心机时，必须事先在天平上精 确平衡离心管及其内容物。每台离心机的不同转子都有其允许的差异。转子不得装载单数管。当转子仅部分加载时，管子必须对称放置在转子中，以使负载均匀分布在转子中。回转。
         2. 在低于室温的温度下离心时。转子在使用前应在冰箱或离心机的转子室中进行预冷。
         3、离心过程中不要随意离开。您应该经常观察离心机上的仪器是否正常工作。如有异响，应立即停机检查，及时排除故障。
         4、每个转子都有其*大允许转速和累计使用限制。使用转子时请参考说明书，不要太快使用。每个转子必须有一个使用档案来记录累计使用时间。如果超过转子的*大使用限制，必须按规定减速使用。
         5、装溶液时，应按各种离心机的具体操作说明书进行，并根据待离心液体的性质和体积选择合适的离心管。离心时被甩出，造成转子不平衡、生锈或腐蚀，制备型超速离心机的离心管往往需要注满液体，以免离心时塑料离心管上部出现凹形变形。每次使用后，必须仔细检查转子，及时清洗并擦干。转子是必须保护的离心机的一部分。移动时要小心，以免碰撞，以免划伤。涂上一层上光蜡进行保护，严禁使用明显变形、损坏或老化的离心管。
        例行维修
        转子
        运行离心机前，切断电源并松开离心机制动器。您可以尝试用手旋转碗，看看是否有任何癫痫发作。
        检查其他零件是否松动和异常。
        打开电源，顺时针方向启动汽车（通常从静止到正常运行大约需要40-60秒）。
        通常每台设备到厂后必须空转3小时左右，才能正常工作。
        材料应尽可能均匀放置。
        必须由专人操作，容量不能超过额定量。
        不要让机器超速操作，以免影响机器的使用寿命。
        机器启动后，如有异常，必须停机检查，必要时必须拆开维修。
        离心机高速运转，请勿用身体接触转鼓，以免发生意外。
        滤布的目数应根据被分离物料的固相颗粒大小来确定，否则会影响分离效果。另外，滤布安装时，滤布
        密封圈应嵌入滚筒的密封槽内，防止物料跑入。
        为保证离心机的正常运转，请每6个月给旋转部件加油保养一次。同时检查轴承的运转和润滑情况，是否有磨损；制动装置中的部件是否磨损，严重时更换；轴承盖是否有漏油现象。
        使用机器后，应做好清洁工作，保持机器整洁。
        不要将非防腐离心机与强腐蚀性材料分开；另外，严格按照设备要求和规定操作，非防爆离心机不得在易燃易爆的情况下使用。
         “涌”
        冷冻离心机组的离心机经常出现“喘振”现象。
        制冷离心压缩机的原理是将分子量大的制冷剂通过高速运动压缩到一个很小的空间中，然后通过冷却冷凝。
        离心式冷水机组的能量调节方法是通过调节高速旋转的导叶角度来调节压缩比
        当制冷量减小时，导叶所做的功减小，压缩气体的压力与吸入压缩机的气体压力相近，导致气体回流产生机械强迫振动。 （也称为“浪涌”）浪涌会对机械部件造成损坏。