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SH30151.03 拜力生物 胎牛血清gibco/gibco
基因组DNA提取
服务项目 | 材料要求 | 服务价格 | 获得DNA量 | 周期 |
细菌基因组DNA提取 | 对数生长期的新鲜菌液1-2ml | 50元/样品 | 1-2ug | 1-2周 |
细胞基因组DNA提取 | 1×106新鲜或冻存的细胞 | 50元/样品 | ≈10ug | 1-2周 |
血液基因组DNA提取 | 1ml新鲜或液氮冻存的样本 | 50元/样品 | ≈10ug | 1-2周 |
组织基因组DNA提取 | 100mg新鲜或-20度冻存的样本 | 50元/样品 | ≈10ug | 1-2周 |
服务项目 | 材料要求 | 服务价格 | 获得RNA量 | 周期 |
细菌总RNA提取 | 对数生长期的新鲜菌液1-2ml | 50元/样品 | ≈10ug | 1-2周 |
细胞总RNA提取 | 1×106悬浮培养或新鲜收集的细胞 | 50元/样品 | ≈1ug | 1-2周 |
血液总RNA提取 | 1ml新鲜或液氮冻存的样本 | 50元/样品 | ≈1ug | 1-2周 |
动物组织总RNA提取 | 100mg新鲜或液氮冻存的样本 | 50元/样品 | ≈100ug | 1-2周 |
植物组织总RNA提取 | 100mg新鲜或液氮冻存的样本 | 50元/样品 | ≈10ug | 1-2周 |
SH30151.03 拜力生物 胎牛血清gibco/gibco
酵母双(单)杂交cDNA文库构建
1. 服务流程
1.1 客户样品QC
1.2 Total RNA的提取。
1.3 mRNA的分离。
1.4 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.5 对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.6 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。
1.7 将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.8 cDNA文库的QC。
a) 检测文库库容量。
b)随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。
1.9 初级文库铺板,抽提质粒
1.10 初级文库质粒与PDEST22(或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定
载体,根据客户需求确定载体)载体进行重组反应,电转化,检测文库质量。
a) 检测文库库容量。
b)每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。
2.送样要求
2.1 针对每个文库,客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本,或者至少500ug总RNA。
3.发货内容
3.1 我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),扩增后初级文库甘油菌,初级
文库中抽质粒,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告,酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。
4.质量标准
4.1 文库库容量:大于1*10^7 CFU。
4.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
4.3 阳性率:大于95%。
5.服务时间
30个工作日内
收费:人民币30000.00
SH30151.03 拜力生物 胎牛血清gibco/gibco
基因甲基化检测
甲基化是在DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferase, DNMT)催化作用下, 利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶环的五号碳原子上加上甲基的共价修饰过程。DNA甲基化修饰现象广泛存在于多种有机体中,是*早发现的修饰途径之一,是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分。大量研究表明,DNA甲基化不改变DNA的**结构,但是能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而在基因的表达及其调控、DNA的复制、细胞的生长发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病 (如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等)发生过程中发挥重要作用。 DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶和少量的N6-甲基腺嘌呤及7-甲基鸟嘌呤。在高等生物中,5-甲基胞嘧啶多发于CpG二核苷酸序列中,基因组中60%-90%的CpG是甲基化的。在甲基转移酶(DNMT)的催化作用下,利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)提供的甲基,使CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶。由于甲基化胞嘧啶极易在进化中丢失,高等真核生物中CpG序列远远低于其理论值,但在基因组的某些区域中,通常是基因的启动子和**外显子区,CpG序列密度很高,可以达均值的5倍以上,成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区,形成所谓的CpG岛。哺乳类基因组中约存在4万个CpG岛,大多位于转录单元的5’区。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普遍现象,而启动子CpG 岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种机制。因此,基因启动子甲基化检测在临床诊断、药物敏感性检测等方面具有很高的应用价值。
服务项目:
1.甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。
SH30151.03 拜力生物 胎牛血清gibco/gibco
特点:适用范围广,能够检测特异位点是否发生甲基化。
2.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,*后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化,称为BSP-直接测序法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法。
特点:**度高,能够准确检测出甲基化的程度百分比。
送样要求:
细胞(≥106 个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥20μl,浓度≥50 ng/μl)。
服务价格:
服务内容 |
数量 |
单价 |
交货期限 |
数量 |
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亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP) |
≤40个 |
800元/样本/基因(5个克隆) |
15~20个工作日 |
>40个 |
协商 |
1000元/样本/基因(10个克隆) |
20~25个工作日 |
>40个 |
协商 |
||
甲基化特异性的PCR法(MSP) |
≤50个 |
350元/样本/基因 |
10~20个工作日 |
>50个 |