**类是皮下移植瘤动物模型
顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。种植的点也有讲究，一般选择血运**回流丰富的腹股沟和腋窝。可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠， 无毛发， T **细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发**展的过程。
肿瘤细胞移植时的简要步骤
首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择 1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。将腋窝或腹股沟用 75% 酒精** 3 次。右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约 1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约 1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌 PBS（或 1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精** 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
然后缝合皮肤，**后将小鼠侧卧位放置于饲养笼的垫料上。2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
影响皮下移植瘤肿瘤形成因素
1. 移植肿瘤细胞的生长状态：肿瘤细胞应选取传代后汇合度达 60%～80% 为理想状态，此时细胞生长进入对数期，生长速度快，状态理想，易于形成移植瘤。
2. 肿瘤细胞收集后种植到小鼠皮下不宜时间过长，应尽快种植到小鼠体内，我们一般在 2 h 内完成。
3. 裹有基质胶的肿瘤细胞种植比单纯的肿瘤细胞种植更易成瘤。基质胶为肿瘤细胞在接受宿主营养之前提供充足营养环境，起到桥梁的作用。
4. 肿瘤组织移植种植时，应将肿瘤组织切成 1 mm3 的小块，过小或过大均不利于肿瘤形成，组织块过大时不利于肿瘤组织中的肿瘤细胞接触新的环境生长，组织块过小时则肿瘤细胞过少，大部分在切块时破坏，均不利于肿瘤形成。
另外从肿瘤组织离体到种植到小鼠皮下不宜时间过长，我们一般在 4 h 内完成移植种植。
02**类是肾被膜下移植瘤动物模型
肾被膜下血运较为丰富，比较适合那些对肿瘤营养环境要求苛刻的肿瘤细胞。
用于肾被膜下移植瘤的小鼠主要是 NOD-D 鼠（D 鼠与非肥胖糖尿病鼠（nonobese diabetic,NOD）杂交而来，T 和 B **细胞、抗原呈递细胞、循环组分及部分 NK 细胞缺陷），这种小鼠表型为白色毛发小鼠，对于饲养条件较为苛刻，需要无菌的 SPF 级饲养环境。
不易成瘤的肿瘤组织一般选择肿瘤肾被膜下种植移植瘤模型。建立模型时，同样首先需要将肿瘤组织用无菌 PBS（或 1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）。
将小鼠用水合氯醛麻醉后俯卧于解剖板上，四肢用胶带固定，在肋脊角靠下的位置剪去约 1.5 cm 直径的皮肤毛发以备皮。75% 酒精** 3 次，用眼科剪将皮肤剪开约 0.5 cm 小口，依次分离皮肤、皮下、侧腹膜。
找到肾脏位置，小心仔细将肾脏提至皮肤切口出，用小尖镊子戳开肾被膜一小口，仔细将小块肿瘤组织送入肾被膜下，一般 2～3 块。然后将肾脏送回腹腔，依次缝合腹膜、皮下组织和皮肤。**后将小鼠放回饲养笼内。2～3 h 后观察是否苏醒。
影响肾被膜下移植瘤肿瘤动物模型形成因素
1. 肿瘤组织处理是否恰当，除和皮下移植瘤相同处理外，应注意多裹些基质胶在肿瘤组织小块上，在塞进肾被膜下时应尽量注意尽量保持肾被膜完整。我们曾单纯将肿瘤组织种植到肾被膜下，成瘤率较低，而裹有基质胶的肿瘤组织较易成瘤。
2. 注意手术时及时找到出血点并及时止血，侧腹膜解剖时损伤，误伤肾脏、肾脏血管等，如不及时处理，很容易引起出血过多导致失血性休克。尤其是阴性出血不易察觉，在**天查看小鼠情况时发现小鼠已死亡等。
3. 手术器械需****，操作台需要无菌环境，避免因感染引起术后小鼠死亡。
03第三类是原位移植瘤动物模型
为了更好的模拟肿瘤的生长情况选择发生肿瘤的器官为移植点。常用的小鼠仍为 NOD-D 鼠。采取开放手术打开暴露相应的发生肿瘤的对应的小鼠器官，将肿瘤组织或肿瘤细胞种植到器官内。此方式因不易操作，且小鼠手术后死亡率较高，一般不常选用。
小鼠实验分组一般 5 只以上为一组，分别设置实验组和对照组。术前将小鼠于动物房饲养一周适应环境，术前术后称量记录体重。小鼠移植瘤一般 2 w 左右即可形成，可用游标卡尺记录瘤体长短径，每周 3 次记录。一般待瘤体体积为 1 cmx1 cm 时处死小鼠，收集肿瘤接着在小鼠身上传代处理或进行其他实验验证。
小鼠实验肿瘤动物模型构建关键要细心，尤其是肿瘤细胞选择，肿瘤组织块处理上要仔细认真，这是影响模型成功建立的关键，还有移植手术时更要耐心细致，不要还没有建立就已经失败。
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