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基尔顿生物科技(上海)有限公司
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RNAi知多少
RNAi知多少
随着RNAi现象的发现和研究到microRNA 成为全球生物研究者关注的热点,与其相关的各种概念不断刷新我们的认识,siRNA、shRNA、microRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、microRNA mimic、microRNA inhibitor 、agomir、antagomir,各种RNA让刚刚接触RNAi的人头昏脑涨,那么,现在让我带大家认识一下他们各自有什么特点,有什么关系。
siRNA是dsRNA在Dicer酶作用下裂解成21-25个核苷酸的小干扰RNA,化学合成的siRNA一般正义链和反义链都是21个碱基,正义链是19个碱基的靶序列加3‘端TT悬头,反义链是19与正义链互补的碱基加3‘端TT悬头
shRNA即short hairpin RNA,shRNA表达载体在polIII启动子控制下转录的短发夹RNA,包括两个短反向重复序列,中间由一茎环(loop)序列分隔的,组成发夹结构,3‘端有UU悬头,一个已知有效的siRNA序列如果需要较长一段时间内维持沉默效应,则shRNA系统是更优选择。
成熟的miRNA是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的,初级转录物称为pri-miRNA。pri-miRNA长度从几百到几千个碱基不等,带有5‘帽子和3’polyA尾巴,以及1到数个发夹径环结构。Pri-miRNA经剪切产生约70个碱基的miRNA前体,即pre-miRNA。pre-miRNA为单一发夹结构,5‘带有磷酸基团,3’有两个突出碱基,并带有3’羟基。pre-miRNA经进一步剪切,形成长度约为22个碱基的单链成熟 miRNA。
microRNA mimic是模拟活体microRNA活性来能增强内源性miRNA的功能的microRNA模拟物,化学合成有单链的也有双链的。
microRNA Inhibitor是化学合成的成熟miRNA互补单链,用来抑制内源性的microRNA的功能。特异的microRNA inhibitor能够被导入到表达特异的microRNA的细胞内,抑制microRNA的作用,也可以用来抑制表达特异的内源性的miRNA的报告载体的表达。
Agomir(microRNA激动剂)是经过特殊标记和化学修饰的双链小RNA,通过模拟内源性的microRNA来调节靶基因的生物学功能
antagomir是根据microRNA成熟体序列设计,经过特殊标记与化学修饰的单链小RNA,是专门用于抑制内源性microRNA的高效阻断剂。
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