快速检测在HACCP系统中的应用-ATP荧光检测仪技术文章
HACCP(危害分析与关键控制点)是国际公认的系统性强、结构严谨而收益显著的预防性食品**控制体系。以HACCP控制体系为核心的食品**管理体系以科学性和系统性为基础,致力于在特定产品的食品链中系统地预防、控制和防范所有涉及食品**的特定危害。传统的食品**控制流程一般建立在集中观察、*终产品的测试等方面去判断食品**危害问题,存在耗用大量人力物力、响应时间慢、指导性差的缺陷。与传统的食品**控制方法相比,HACCP强调企业本身的作用,而不是依靠对*终产品的检测或政府部门取样分析来确定产品的质量。[1]但同其他质量控制体系一样,HACCP系统仍然需要检测技术和手段的支持。生产企业作为产品质量的**责任人,应建立以GMP(良好操作规范)、疫病疫情控制、残留控制、检验检测、产品追溯等为主要内容的企业质量自检自控体系,对产品的食品**特性进行有针对性的取样、检测和分析,包括原(辅)料、半成品、成品检测,以验证HACCP计划运行的有效性。HACCP开始是为控制食品微生物学的**性而产生的,近年来在食品中化学危害的**控制得到广泛应用。HACCP体系不是一个孤立的体系,能否进行有效的控制,不仅取决于食品生产加工企业,还涉及到原料来源、储存、运输、销售等环节,其中尤以生产企业的原料来源*难控制。食品、农产品的原料来自于源头,如果原料在源头上受到污染,例如重金属问题、农药兽药残留、疫病疫情有害物质问题不可能在加工环节得到解决,因此很多企业把原料收购作为HACCP体系关键控制点,但在实际应用中如果没有实验室检测,该控制点的监控和验证往往流于形式,达不到控制的目的。
HACCP体系的一大特点就是其管理的时效性和经济性,对实验室检测的要**快速、灵敏、简便、经济,尽可能体现在线测量的效果,以提高系统的响应速度,保证系统可操作性。但是一些经典常规检测方法具有很大的局限性,如传统生物方法检测周期长,不适于企业建立快速有效的产品追溯体系;气相色谱、液相色谱等化学方法需要昂贵的大型仪器设备,检测成本高,在中小型企业难以推广。本文通过对近几年涌现的实验室快速检测技术的介绍,旨在促进其在食品企业HACCP体系中的推广和应用。
1食品**快速检测技术介绍
1.1快速检测技术
快速检测技术一般体现在以下几个方面(1)缩短检测时间(2)简化检测操作过程(3)实现自动化(4)可进行多项目或多样品的同时检测。采用先进的大型分析仪器也可实现快速检测,如色谱-质谱联用技术在农兽药多残留检测中的应用,但考虑到实验室运行成本,在本文中未进行重点推荐。
1.2食品生物性**危害检测技术及应用
1.2.1有害微生物检测
1.2.1.1显色培养基法:在选择培养基的基础上进行改良,利用**特有的反应,使目标菌在培养基上显示出一定的颜色。商品化的产品有沙门氏菌、大肠杆菌、O-157、金黄色葡萄球菌、李斯特菌属、弧菌等培养基,一般培养24h出结果,但阳性可疑样品需进一步鉴定。国内外文献证明其敏感性、选择性、特异性优于传统分析培养基。
1.2.1.2快速测试片法: 测试片由营养培养基、吸水凝胶和酶显色剂组成,通过酶显色剂的放大作用,使**显现出来。商品化的产品有**总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌属等测试片,部分方法已经得到AOAC认可。国内文献对3M公司生产的测试片和国标常规方法进行比较,结果呈良好的相关性。该方法操作简便,省去了配制培养基、器皿清洗、**等大量辅助性工作。
1.2.1.3VIDAS法:根据酶联荧光**检测工作原理,自动完成捕获、洗涤、标记、底物反应、终止与读数的全过程。商品化的产品可进行沙门氏菌、李斯特菌属、单核细胞增生李斯特菌、葡萄球菌肠**、大肠埃希菌O157、弯曲菌检测。该方法比常规方法节省1/2-1/3的时间,国内标准也已经逐渐采用,但阳性可疑样品需进一步鉴定。
1.2.1.4其它快速检测方法:乳胶凝集试验、金标**分析方法、聚合酶链反应(PCR)技术、DNA探针检测法、ELISA方法。上述方法各有特点,简化了操作程序,缩短了检测时间,提高了致病菌的检出率,很多已成为国外官方机构公定标准方法。
1.2.2****检测
1.2.2.1ELISA法:商品化ELISA试剂盒可检测黄曲霉**、T -2**、伏马菌**、赭曲霉**、玉米赤霉烯酮、呕吐**等。国内相关的应用研究有:刘冬儿用酶联**吸附法测定食品中的黄曲霉**B1,检测灵敏度比薄层色谱法提高了300-400倍,整个测定时间仅为4小时。
1.2.2.2**亲和柱-荧光分光光度法:使用生物大分子**亲和柱进行样品分离、净化,用荧光仪进行定量。可检测黄曲霉**总量、黄曲霉**B和M1、呕吐**、伏马菌**、赭曲霉**A、玉米赤霉烯酮、T-2**等项目,检测限*低可达1ug/kg,我国家标准中已经采用该方法。
1.2.3动物疫病检测
12.3.1ELISA法 国外商品化的试剂盒可进行禽类、猪、羊、牛、兔、鱼等各类动物疫病抗体的检测,部分试剂盒产品可以进行动物非感染、接种疫苗和自然感染的鉴别。国内相关的应用研究涉及病毒抗体检测和病毒抗原检测方法:潘文波等使用美国UBI公司ELISA试剂盒进行了猪的口蹄疫病毒(FMDV)感染抗体和**抗体的检测,研究者认为该方法更方便、快捷和敏感。[2]肖运才等建立了禽流感病毒(AIV)抗原的夹心ELISA方法,敏感性比血球凝集试验高出16倍以上。[3]
12.3.2其它方法 动物疫病快速检测技术包括:病原学诊断技术和**学诊断技术。**学诊断中的血清学试验方法简易而且快速,广泛用于**抗体水平的监测,为动物疫病的早期诊断和防治提供依据。主要有:(1)中和试验方法(2)血细胞凝集抑制试验方法(HI)(3)琼脂扩散试验方法(AGP),国内外学者普遍证实ELISA法敏感性大于AGP和HI试验。
1.3食品化学性**危害检测技术及应用
1.3.1兽药残留检测
1.3.1.1ELISA法:目前,ELISA试剂盒在兽药残留检测中已得到广泛使用,不但可进行氯霉素、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、链霉素、庆大霉素、新霉素、依维菌素、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺喹恶啉、恩诺沙星、己烯雌酚、安定、皮质类固醇、去甲基雄三烯醇酮等单项目的检测,还可进行磺胺类、β-激动剂、四环素类、氟喹诺酮类、阿维菌素类等多项目检测。
1.3.1.2其它方法:微生物抑制试验,容易受组织中其它***的影响,特异性低、灵敏度低。放射**测定法,使用有害的放射性同位素,需要特殊的辐射防护设备。
1.3.2农药残留检测
1.3.2.1胆碱酯酶抑制法:包括速测卡、速测片、分光光度法,均是利用这一原理,检测有机磷、氨基甲酸酯两类农药,是目前广泛使用的农药残留快速检测方法,已经建立了蔬菜检测的国家推荐标准。但该方法为定性方法,灵敏度较低,检出限无法满足出口食品限量要求,对葱、姜、蒜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇、番茄等含有植物活性物质和色素含量高的蔬菜样品,容易产生假阳性。
1.3.2.2ELISA法:国外已经研制出包括杀虫剂、**剂、除草剂、生长调节剂等几十种农药的ELISA方法检测试剂盒。据报道,美国使用的ELISA试剂盒对有机磷农药普遍的*小检出浓度达0.02mg/kg,对氨基甲酸酯类农药普遍的*小检出浓度达0.3mg/kg。国外有关文献报道了奶、肉、肝、蜂蜜等动物源性样品中的西维因、呋喃丹、菊酯(总量)、灭多威、百草枯、伏虫脲、2,4-D、西玛津、阿特拉津、多菌灵、克百威、涕灭威等残留的检测。[4]国内有关应用研究主要是水、土壤、蔬菜、饲料等环境样品和植物性样品的检测,直接用于动物源性食品的应用研究非常少。
1.3.3常规化学检测
目前有商品化的亚硝酸盐、吊白块、甲醛、双氧水、二氧化硫和亚硫酸盐、酸价、过氧化值、甲醇、杀鼠药的快速检测试剂盒、速测卡或速测仪,一般可在30分钟内完成现场检测,但阳性可疑样品需进一步证实。
2实验室快速检测在HACCP系统中的应用建议
HACCP企业应科学分析食品**危害,采用有效监控手段和必要的验证措施,使产品达到预期要求。如动物疫病的控制关键在养殖环节,企业建立有效的动物疫病早期快速准确的检测诊断体系,了解动物感染状态和**状态水平是疫病疫情防治和控制的关键。针对农药残留、兽药残留的检测,可根据进口国要求、产品种类、成品检测发现的问题,制定重点产品、重点项目的原料控制计划,一旦发现阳性样品,可以迅速追踪至阳性样品来源的饲养(养殖)埸,在食品链中找到污染发生的原因,及时将其消除,确保食品的**。重金属污染来源主要是养殖环境中水、空气、土壤和饲料等,可根据原料产地、区域合理地划分检测批,制定科学的检测方案。
快速检测是食品**控制发展需要和必然趋势,但是在快速方法选择中应坚持科学的谨慎态度,因为检测结果的准确性关系到千千万万的产业农民的切身利益。许多快速检测方法在国际上作为通行的初筛检测方法,可疑样品再使用经典方法进行确证。建议出口企业可以采取先自己进行实验室初筛检测,对阳性可疑样品委托检验检疫系统的专业实验室进行确证检测,这样既保证了检测结果的准确性,又*大程度地提高监测速度、降低了检测成本。
检测成本一直是许多企业实验室无法正常运行的根本原因,如选择高效液相色谱用于出口动物源性食品的兽药残留分析,仪器设备投入60万元左右,每天也仅能检测10余个样品,仪器运行成本比较高,特别是对部分季节性出口产品,可能出现出口旺季仪器分析无法满足大批量原料集中检测需要,出口淡季仪器使用率非常低的情况。若使用ELISA方法,实验室仪器设备投入6万元左右,一次可检测40多个样品(双孔平行检测),单个样品试剂成本约60元,同时具有灵敏度高、特异性强、操作简便、处理样品量大、不需要昂贵的仪器设备特点,非常实用。
HACCP企业在选择方法时应兼顾以下原则:①方法可定量,具有高灵敏度和选择性,检测限应满足进口国要求。②操作简便,分析快速,满足HACCP体系在线动态控制、实时监控的需要。③适用于大批量样品的同时检测,可满足出口企业原料集中检测的需要。④在国际上认可程度较高。⑤检测成本相对较低,可以被大多数企业所接受。
转自食品伙伴网