用高效液相色谱（HPLC）如何进行蛋白质的纯度检测及含量测定?

如何用高效液相色谱（HPLC）进行蛋白质的纯度检测及含量测定?

首先,蛋白质的测定一般用凝胶渗透色谱
分子量测定：用HPLC测定几个分子量已知的蛋白质,绘制分子量与调整保留时间相对应的标准曲线,然后再在相同条件下测未知蛋白的保留时间,用标准曲线对照即可的未知蛋白的分子量；
含量测定：用蛋白质标样配制一系列不同浓度的蛋白质溶液,绘制蛋白质浓度与峰高/峰面积相关的标准曲线,再在相同条件下测位置样品的峰高/峰面积,即可得未知样品的浓度；
纯度测定：保证待测样品中所有组份均出峰的情况下,用目标蛋白的峰面积/峰高除以所有峰峰面积/峰高的总和即可的目标蛋白的纯度.

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