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关于胎牛血清灭活的问题
关于胎牛血清灭活的问题
首先说说热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,在对补体灭活以外,还可去除血清中的支原体的污染。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等,其中*常用的就是56℃热处理30分钟。现在好像不主张热灭活,热灭活经常给血清产品带来负面影响,对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生,此外,有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。
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处理步骤
① 选用与血清瓶同规格的对照瓶一个。
②对照瓶内放入与血清等体积的水。
③ 温度预试
④ 血清灭活:血清瓶与带温度计的对照瓶一齐放入水浴箱中,待温度计所示温度上升至56℃时, 定时30分钟。
⑥ 大瓶血清灭活后,进行分装,在-20到-70℃保存。
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活**细胞和巨噬细胞。在**学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭**清。
/ D% u5 {# A- c1 D2 g; y实验显示,经过正确处理的热灭**清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!
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