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有关胎牛血清使用问题的建议
有关胎牛血清使用问题的建议
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、**、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。
显然,胎牛血清是品质*高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分*少。
1)建议胎牛血清应保存在-5摄氏度~-20摄氏度。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的**容器内,再放回冷冻。
2)建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2---8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
3)血清中沉淀物的出现有许多种原因,但*普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以1000转/分~2000转/分稍微离心,上清液即可直接加入培养基内使用。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
4)一般以56℃、30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,**细胞、巨噬细胞的趋化和激活。
实验显示,即使对血清进行正确的热灭活处理,对大多数的细胞而言也是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。
而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是"小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保您的血清的质量。
质量控制、容器管道清洁度监控、设备及工艺卫生监控、膜可靠性监控、加工过程中间样品检测、加工时间控制。
5)我们建议您在使用血清的时候,注意正确的血清解冻步骤,并尽量避免灭**清及长时间的将血清置于高温环境中。
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