Ni-NTA HRP 是由Ni-NTA 共价偶联HRP 后得到，每个HRP 共价结合2-3 个Ni-NTA，Ni-

NTA 可以高特异性结合6xHis 标签。该产品可以广泛用于ELISA、Western Blotting、**组化

等试验，用以特异性检测6xHis 标签。这种产品简化了检测6xHis 标签的操作，实现了一步检

测，特别是在以小鼠为宿主的标签蛋白检测中，可以避免小鼠抗体引起的交叉反应。

1. ELISA 实验中，1:1000-10000 稀释使用；Western Blotting、**组化实验中，建议

1:100-2000 稀释使用。

2. 封闭液：封闭液应该选用1%BSA/TBST 缓冲液，避免用牛奶；

3. 缓冲液成分：应该避免EDTA、咪唑或者其他二价金属离子；

4. 在 WB 实验中，如果需要去除膜上的NTA-HRP，只需要把浸入100mM咪唑，震荡洗涤30 分钟，然后用缓冲液洗涤即可，非常简单方便；

· 避免和EDTA 等金属螯合剂共同使用，这类试剂会螯合Ni-NTA 中的镍离子，影响

NTA 和6xHis 的结合；

· 咪唑同样会和镍离子结合，缓冲液中含有咪唑会影响NTA 和6xHis 的结合；

· 信号没有或者太弱：1）6xHis 没有充分暴露，WB 可以在转膜后用巯基乙醇和6M 尿

素处理膜，然后在加NTA-HRP，Elisa 可以在包板前，先对蛋白加入巯基乙醇后加热

处理；2）目标蛋白或者NTA-HRP 量太少，应增加用量，延长反应和曝光时间；

· 背景太高：1）封闭不彻底；2）目标蛋白或者NTA-HRP 量太多；

· 杂带：1）WB 高分子量杂带，处理样品不彻底，应该加入DTT 并煮沸处理；2）目标

降解产生低分子量杂带；