食品中三聚氰胺检测的固相萃取方法

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为牛奶样品中三聚氰胺检测的前处理方法，HPLC法作为检测手段。SimplyGreen  MCX固相萃取柱60mg/3mL柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物

三聚氰胺 (CAS:108-78-1)

三、应用范围

本方法适用于食品中三聚氰胺的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》。

五、实验材料

 SimplyGreen  MCX固相萃取柱60mg/3mL 。

六、实验方法

1、样品提取

称取2.0ｇ试样(精确至0.001 g)于50 mL离心管中，加入15 mL 1%三***溶液和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min，4000 r/min离心10 min。上清液经三***溶液润湿的滤纸过滤后，用三***溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，加入5 mL水混匀后做待净化液。

2、SPE柱净化

(1)活化：使用前依次用3 mL甲醇、5 mL水活化柱子。
(2)上样和洗脱：将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3 mL水、3 mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6 mL5%氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。
(3)重新溶解：洗脱液于50 ℃下用氮气吹干，残留物用1 mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2690
检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：240 nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相：离子对试剂缓冲液(准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL水溶解，调节PH至3.0后，定溶至1 L备用)-乙腈(80:20, v/v)。
柱温：室温
进样体积：20µL
流速：1 mL/min

七、实验结果

1、2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果
表1 2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果

表2 W品牌MCX柱2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺的添加回收结果

2、添加水平为2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图

图1  添加水平为2.5mg/kg牛奶基质中三聚氰胺检测色谱图