动物性食品中磺胺类药物多残留检测的固相萃取方法

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为猪肉样品中磺胺类药物残留检测的前处理方法，HPLC法作为检测手段。SimplyGreen MCX(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物

磺胺醋酰(CAS:144-80-9)，磺胺吡啶(CAS:144-83-2)，磺胺对甲氧嘧啶(CAS:651-06-9)，磺胺甲基嘧啶(CAS:127-79-7)，磺胺二甲基嘧啶(CAS:57-68-1)

三、应用范围

本方法适用于动物性食品中磺胺类药物多残留的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB 29694-2013 食品安全国家标准  动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定 高效液相色谱法》。

五、实验材料

 SimplyGreen MCX固相萃取柱60mg/3mL

1、样品提取

称取猪肉试料(5±0.05) g，于50 mL离心管中，加乙酸乙酯20 mL，涡旋2 min，4000 r/min离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL，重复提取一次，合并两次提取液。鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液4 mL，于40 ℃下旋转蒸发浓缩至少于3 mL，转至10 mL离心管中。用0.1 mol/L盐酸溶液2 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混和30 s，3000 r/min离心5min， 弃正己烷。再次用正己烷3 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中，涡旋混和30 s，3000 r/min离心5 min，弃正己烷，取下层液备用。

2、SPE柱净化

(1) 活化：MCX柱依次用甲醇2 mL和0.1 mol/L盐酸溶液2 mL活化。
(2) 上样和洗脱：取备用液过柱，控制流速1 mL/min。依次用0.1 mol/L盐酸溶液1 mL和50%甲醇乙腈溶液2 mL淋洗，弃去淋洗液。用5%氨化甲醇4 mL洗脱，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于40 ℃氮气吹干，加0.1％甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2690
检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：270nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相：A:乙腈    B:0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件

流速：1 mL/min
柱温：室温
进样体积:20µL

七、实验结果

1、0.2mg/kg猪肉基质中磺胺的添加回收结果
表2  0.2mg/kg猪肉基质中磺胺的添加回收结果

表3 W品牌0.2mg/kg猪肉基质中磺胺的添加回收结果

2、添加水平为0.2mg/kg猪肉基质中磺胺检测色谱图

图1  添加水平为0.2mg/kg猪肉基质中磺胺检测色谱图