猪肉中激素检测的固相萃取方法 （SimplyGreen HLB）

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测猪肉中激素含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

醋酸甲羟孕酮(CAS:71-58-9)，睾酮（CAS:58-22-0）。

三、应用范围

本方法适用于猪肉中激素检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

SimplyGreen  HLB固相萃取柱60 mg/3 mL。

五、实验步骤

1、样品提取

准确称取猪肉5.0g于50mL离心管中加入水20mL，甲醇5mL，涡旋1min，4500r/min离心5min，取上清

液，备用。

2、SPE柱净化

(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL水活化。

(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入提取备用液，弃去流出液；加入3 mL 35%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；加6mL甲醇洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min）。

(3)重新溶解：40℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1mL甲醇溶解，经0.22μm滤膜重新过滤，供HPLC测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)

检测器：Waters 2487 紫外检测器

检测波长：230 nm

流动相：A：乙腈B：水

洗脱方式：梯度洗脱

表1:梯度洗脱条件

流速：1.0 mL/min

进样体积：20μL

六、实验结果

1、1.0mg/kg猪肉中激素的添加回收结果

表2 1.0mg/kg猪肉中激素的添加回收结果

2、添加水平为1.0mg/kg猪肉中激素检测的液相色谱图

图1添加水平为1.0mg/kg猪肉中激素检测的液相色谱图