动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留检测的固相萃取方法 （SimplyGreen HLB）

一、实验目的

本法为以SimplyGreen HLB(60mg/3mL)柱开发的针对动物源食品 (猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品 )中硝基呋喃类代谢物残留检测的样本前处理净化方法，HPLC法作为检测手段。SimplyGreen HLB(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物

四种硝基呋喃类代谢物：呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮 (缩写AMOZ, CAS:43056-63­

9)、呋喃西林代谢物氨基脲 (缩写SEM, CAS:563-41-7 )、呋喃妥因代谢物1-氨基-2-内酰脲 (缩写AHD, CAS:2827-56-7)和呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮(缩写AOZ, CAS:80-65-9)。

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品包括猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)中硝基呋喃类代谢物残留检测。

四、参考标准

《GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》和《农业部1077号公告-2-2008 水产品中硝基呋喃代谢物残留量的测定》。

五、实验材料

SimplyGreen HLB固相萃取柱60mg/3mL；W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。

六、实验方法

1、样品待测溶液制备

(1) 样品称取脱脂                                                                                                                                                                           称取待测样品2 g(精确到0.01 g)，置于50 mL离心管中加入10 mL甲醇-水混合物(2:1)，振荡混匀10 min， 4000 r/min离心10 min，吸取清液弃掉、离心管中试样备用。

(2)水解衍生化 向上述离心管中加入20 mL0.2 mol/L盐酸，振荡混匀10 min，后加入0.4 mL 0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛(0.075 g 2-硝基苯甲醛溶于10 mL 二甲亚砜)，涡旋混匀1 min，置于37 ℃恒温振荡器水浴中避光反应16h。 将上述衍生液，放置至室温，加入5 mL0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液，用1 mol/L NaOH调节pH到约7.4， 4000 r/min离心10 min，上清液(对脂肪含量多的试样，可加入5 mL正己烷，振荡2 min，4000 r/min离心5 min 吸取并弃掉正己烷)待净化。

2、SPE柱净化

(1)活化：依次用5 mL甲醇、10 mL水活化。

(2)上样和洗脱：取上述备用液控制流速小于2 mL/min过柱。待样液全部通过后用10 mL水淋洗上样柱，弃去全部流出液并真空抽干，然后用5 mL乙酸乙酯洗脱柱子上的待测成分。

(3)重新溶解：收集洗脱液，于40℃氮气吹干，准确加入1 mL 乙腈/水(1:2, v/v)溶液溶解残余物混匀，0.22 µm 滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2690 色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6mm，5 µm) 检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：275nm 流动相：A:乙腈 B:0.01mol/L乙酸铵（0.77g乙酸铵，1000 mL水溶解，甲酸调pH 3.5 ）

洗脱方式：梯度洗脱

表1 洗脱梯度条件

柱温：30 ℃

流速：1.0 mL/min

进样量：20 μL

七、实验结果

1、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的添加回收结果

表2 添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的添加回收结果

表3 W品牌同型号柱，添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的添加回收结果

图1 添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的紫外检测色谱图