动物源性食品中四环素类兽药残留量检测的固相萃取方法（SimplyGreen HLB）

一、实验目的

本法为以SimplyGreen HLB(60mg/3mL)柱开发的针对动物源食品(猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品)中硝基呋喃类代谢物残留检测的样本前处理净化方法，HPLC法作为检测手段。SimplyGreen HLB(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物

土霉素(CAS:79-57-2)，四环素(CAS:60-54-8)，金霉素(CAS:57-62-5)，强力霉素(CAS:564-25-0)

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品中四环素类药物多残留的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 21317-2007 食品安全国家标准  动物源性食品中四环素类兽药残留量 高效液相色谱法》。

五、实验材料

SimplyGreen HLB(60mg/3mL)

六、实验方法

1、样品提取

称取混匀牛奶试样5 g(精确到0.01 g)，置于50 mL离心管中，用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至50 mL，漩涡混合1 min，冰水浴超声10 min，转移至50 mL离心管中，冷却至0 ℃-4 ℃，5000 r/min离心10min(温度低于15 ℃)，用快速滤纸过滤待净化。

2、SPE柱净化

(1)活化：HLB柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2)上样和洗脱：准确吸取10 mL备用液过HLB固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇水（1:9，v/v）淋洗，弃去全部流出液。2.0kPa以下减压抽干5 min，然后用10 mL甲醇-乙酸乙酯(5:95, v/v)洗脱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于40 ℃氮气吹干，加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695
检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：268nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相：A:乙腈      B:10 mmol/L三氟甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 洗脱梯度条件

流速：1 mL/min
柱温：室温
进样体积:20µL

七、实验结果

1、0.8mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果
表2 0.8mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果

表3 W品牌0.8mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果

2、 添加水平为0.8mg/kg牛奶基质中四环素检测色谱图

图1  添加水平为0.8mg/kg牛奶基质中四环素检测色谱图