牛奶中氟苯尼考检测的固相萃取方法
一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测牛奶样品中的氟苯尼考残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、实验目标物
氟苯尼考（CAS:
73231-34-2）。
三、应用范围
本方法适用于牛奶中氟苯尼考的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
SimplyGreen HLB 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat. No.)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取牛奶2 g（精确到0.001 g），加入乙酸乙酯15 mL，高速均质1 min，加入5
g无水硫酸钠，涡旋振荡1 min，摇床振荡10 min。4000 r/min转速离心5 min。将上清液转移至梨形瓶中，于45 ℃旋蒸至近干，用6 mL水溶解残渣，5 mL×2次正己烷除脂，弃去正己烷层，取3 mL水层待净化。
2、SPE柱净化
(1) 活化：HLB 固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2) 上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2 mL/min的流速过柱，弃去滤液，用5 mL水淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干5 min。用5 mL 5%氨化甲醇洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于45 ℃氮吹吹干，用1 mL甲醇定容，0.22 μm微孔滤膜过滤，供HPLC上机测试。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2690
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm )
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：224 nm
流动相：A：水 B：乙腈
洗脱方式：等度洗脱
表1 流动相等度洗脱条件
|
时间/min |
A(%) |
B(%) |
|
20.00 |
83 |
17 |
流速1mL/min
进样体积：20uL
五、实验结果
1、牛奶氟苯尼考的5mg/kg添加回收结果
表2 牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收结果
|
名称 |
回收率（%） |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
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|
1 |
2 |
3 |
|||
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氟苯尼考 |
112.34 |
109.23 |
111.84 |
111.14 |
1.50 |
2、添加水平为5mg/kg牛奶中氟苯尼考残留物色谱图
图1 添加水平为5mg/kg牛奶中氟苯尼考残留物色谱图
