牛奶中氢化可的松检测的固相萃取方法

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法操作方便，可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用。

二、实验目标物

氢化可的松(CAS:50-23-7)。

三、应用范围

本方法适用于牛奶中氢化可的松的检测及确证。

四、实验材料

SimplyGreen Silica固相萃取柱500mg/6mL

五、实验方法

1、样品提取

称取牛奶试料5 g于50 mL离心管中，加30 mL乙酸乙酯，均质1 min，350 r/min摇床振动20 min，4200 r/min离心10 min，移取乙酸乙酯层。残渣中加乙酸乙酯25 mL，均质1 min，350 r/min摇床振动20 min，4200 r/min离心10 min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，40 ℃旋转至近干，加乙酸乙酯1 mL和正己烷5 mL，溶解残渣，待净化。

2、SPE柱净化

(1)活化：用6 mL正己烷活化Silica固相萃取柱。
(2)上样和洗脱：取待测液，通过Silica固相萃取小柱富集，弃去流出液。用6 mL正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干5 min，弃去流出液。用6 mL正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脱萃取柱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于40 ℃氮气吹干，加20%乙腈水溶液2.0 mL溶解残余物，过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱测定。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695
检测器：Waters 2487 双波长检测器
检测波长：254 nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相：A：乙腈         B：0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1  梯度洗脱条件

流速：1 mL/min
进样体积：20 μL

六、实验结果

1、 牛奶中氢化可的松的1mg/kg添加回收结果
表2  牛奶中氢化可的松的1mg/kg添加回收结果

2、 添加水平为1mg/kg牛奶中氢化可的松检测色谱图

图1  添加水平为1mg/kg牛奶中氢化可的松检测色谱图