食品中喹诺酮检测的固相萃取方法
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
依诺沙星(CAS：74011-58-8 ),恩诺沙星(CAS：93106-60-6),培氟沙星(CAS：70458-95-6 )，丹诺沙星(CAS：119478-55-6)
三、应用范围
本方法适用于食品中喹诺酮的HPLC检测及确证。
四、参考标准
推荐性国家标准《GBT 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法》
五、实验材料
SimplyGreen HLB 固相萃取柱200mg/6mL。
六、实验方法
1、样品提取
称取均质试样5.0ｇ试样（精确至0.001ｇ）于50mL离心管中，加入20ｍＬEDTA Mellvaine缓冲溶液，1000r/min涡旋混合1min，超声提取10min，10000r/min离心5min（温度低于5度），提取三次合并上清液。
2、SPE柱活化
净化前用6mL甲醇、6mL水活化。
3、上样和洗脱
将提取液以2mL/min的速度过柱，弃去滤液，用2mL5%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用6mL甲醇洗脱并收集洗脱液。
4、重新溶解
50℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1mL0.2%甲酸水溶液溶解。1000r/min涡旋混合1min，经0.45um有机滤膜过滤后用于上机测定。
5、HPLC条件
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6*250mm)
流动相：A乙腈 B[0.1%甲酸的水溶液] 梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
|
时间/min |
A/% |
B/% |
|
0.00 |
9 |
91 |
|
11 |
9 |
91 |
|
20 |
29 |
71 |
|
25 |
37 |
63 |
|
26 |
100 |
0 |
|
30 |
100 |
0 |
|
31 |
9 |
91 |
|
36 |
9 |
91 |
流速：1mL/min
柱温：室温
进样体积:20μl
七、实验结果
1、6ppb牛奶基质中喹诺酮的添加回收结果
表2 6ppb牛奶基质中喹诺酮的添加回收结果
|
名称 |
回收率（%） |
|
依诺沙星 |
92.8% |
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丹诺沙星 |
82.4% |
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培氟沙星 |
93.8% |
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恩诺沙星 |
81.2% |
2、 空白样品添加喹诺酮残留物色谱图
