水产品中孔雀石绿检测的固相萃取方法

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

孔雀石绿(CAS:569-64-2) 。

三、应用范围

本方法适用于鲜活水产品中孔雀石绿的检测的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 19857-2005水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》。

五、实验材料

SimplyGreen N 中性氧化铝固相萃取柱1000mg/3mL

六、实验步骤

1、         样品提取

准确称取鱼肉样品5.0 g于50 mL离心管中，加入10 mL 乙腈，超声波振荡提取5 min， 涡旋1 min， 4000r/min离心5 min，上清液转移至50 mL离心管中,残渣按照上述步骤重复提取一次；合并两次提取液，用乙腈定容至25 mL。

2、         SPE柱净化

(1) 活化：中性氧化铝固相萃取柱使用前用5 mL乙腈活化。

(2) 上样和洗脱：在中性氧化铝固相萃取柱上加入5 mL待净化样品，收集流出液，然后用4 mL乙腈洗脱，合并收集流出液。

(3) 重新溶解：流出液45 ℃氮吹至近干，1 mL乙腈定容，过0.45 μm滤膜，待上机测试。

3、HPLC条件

设 备：Waters Alliance 2690

色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5μm)

检测器 ：Waters 2487 紫外检测器

流动相：A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸铵缓冲溶液

洗脱方式：梯度洗脱

表1 梯度洗脱条件

流速：1.2 mL/min，检测波长：618 nm，进样体积: 50 μL

七、实验结果

1、0.5 mg/kg鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果

表2 0.5 mg/kg鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果

2、添加水平为0.5 mg/kg鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图

图1 添加水平为0.5 mg/kg鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图