色谱柱的清洗和再生
在色谱柱清洗开始和结束时，都应按照色谱柱检测报告中所列的实验条件对色谱柱测量柱效、容量因子等，以确保色谱柱得到清洗，柱效得到提高。
在所有情况下(除非另有说明)，一般使用40-60倍柱体积的溶剂。需确保色谱柱上没有缓冲液或样品，且清洗前色谱柱中的残留溶剂应与第一种清洗溶剂混溶。清洗后，确保流动相可与色谱柱中的残留溶剂混溶。
正相色谱柱
1. 用四氢呋喃冲洗
2. 用甲醇冲洗
3. 用四氢呋喃冲洗
4. 用二氯甲烷冲洗
5. 用无苯正己烷冲洗
反相色谱柱
1. 用 HPLC 级水冲洗，在冲洗过程中注入4等分共 200μL 的 DMSO
2. 用甲醇冲洗
3. 用氯仿冲洗
4. 用甲醇冲洗
阴离子交换色谱柱
1. 用 HPLC 级水冲洗
2. 用 50mM 到 1M 的适当缓冲液进行梯度冲洗
3. 用 HPLC 级水冲洗
4. 用甲醇冲洗
5. 用氯仿冲洗
阳离子交换色谱柱
1. 用HPLC级水冲洗，在冲洗过程中注入 4 等分共 200μL 的 DMSO
2. 用四氢呋喃冲洗
蛋白体积排阻色谱柱
从蛋白体积排阻填料中移除污染物有两种清洗/再生方法
弱保留蛋白
1. 用30mL 0.1M 磷酸盐缓冲液 (pH 3.0) 冲洗
强保留蛋白
2. 用 100% 水到 100% 乙腈梯度冲洗60分钟
多孔石墨碳色谱柱
多孔石墨碳有四种清洗或再生方法。使用哪种方法取决于分析物以及对应的流动相
1.酸/碱清洗：用水相比例较高的流动相分析离子化合物时
1.1 反接色谱柱
1.2 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氢呋喃:水 (1:1) 溶液冲洗
1.3 用 50mL 包含 0.1% 三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃:水 (1:1) 冲洗
1.4 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氢呋喃:水 (1:1) 溶液冲洗
1.5 用 70 倍柱体积的 THF 冲洗
1.6 用甲醇/水 (95:5) 冲洗以重新平衡
1.7 重新倒转色谱柱方向
2.强有机溶剂清洗
用水相比例较高的流动相分析极性和/或离子化化合物时
2.1 用 50mL 丙酮冲洗
2.2 用 120mL 二丁醚冲洗
2.3 用 50mL 丙酮冲洗
2.4 用水溶液流动相冲洗直到达到平衡
3．正相模式的清洗
适用于使用正相流动相进行分析的应用。
3.1 用 50mL 二氯甲烷冲洗
3.2 用 50mL 甲醇冲洗
3.3 用 50mL 水冲洗
3.4 用 50mL 0.1M 盐酸冲洗
3.5 用 50mL 水冲洗
3.6 用 50mL 甲醇冲洗
3.7 用 50mL 二氯甲烷冲洗
3.8 用流动相冲洗直到达到平衡
4. 移除 TFA 和 DEA
TFA 和DEA可能吸附于多孔石墨碳表面；在流动相中使用这些添加剂后，应对色谱柱进行再生以确保始终实现 Hypercarb的原始选择性和最佳性能。
再生程序如下：
4.1 移除 TFA：用 70 倍柱体积的 THF 冲洗。
4.2 移除 DEA：将柱温设为75℃，然后用120倍柱体积的ACN 冲洗。
带金属对离子的聚合物介质色谱柱
对于带金属对离子的聚合物柱，有三种再生方法。下表详细列出了各种再生方法。
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色谱柱类型 |
金属污染 |
有机污染 |
柱清洁 |
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氢型 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M H2SO4 在 25℃ 条件下重新 4到 16 小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O在 25℃条件下冲洗 4 小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: 0.01M H2SO4 在 65℃ 条件下冲洗 4 小时 |
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钙型 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M Ca(NO3)2 在pH 6.3 和85℃条件下冲洗4到 16小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在 25℃ 条件下冲洗4小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在 25℃ 条件下冲洗 4 小时 |
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钠型 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M NaNO3 在85℃条件下冲洗 4到16小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O在 25℃ 条件下冲洗4小时
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反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在25℃条件下冲洗4小时
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铅型 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M Pb(NO3)2 在 pH 5.3 和85℃条件下冲洗 4 到 16 小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min的流速，用 20:80 ACN: H2O在 25℃ 条件下冲洗4 小时 |
反接色谱柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在 25℃ 条件下冲洗4小时 |
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