怎么使Waters ACQUITY BEH色谱柱保持良好的性能？
怎么使Waters ACQUITY BEH色谱柱保持良好的性能？
为确保Waters ACQUITY BEH色谱柱始终保持理想性能，请遵循以下原则：
a. 样品前处理
1. 样品中的杂质往往会污染色谱柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有适合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色谱柱或Sep-Pak™小柱净化样品。
2. 为获得理想峰形和灵敏度，优先选用运行分析时拟用的流动相或比它更弱的流动相来制备样品。除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性配件包，否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。
3. 如果样品不溶于流动相，请确保样品、溶剂和流动相可以混溶，以避免样品和/或缓冲盐析出。
4. 用0.2μm滤膜过滤样品，去除颗粒物质。如果用于溶解样品的溶剂含有机溶剂（如乙腈、甲醇等），请确保滤膜材料不溶于该溶剂。请联系滤膜生产商了解滤膜的溶剂兼容性。或者，可以考虑在8000 rpm下离心样品溶液20 min，然后将上清液转移至适当的样品瓶中。
5. 对于亲水作用色谱(HILIC)分离，样品必须用高百分比的有机溶剂制备（例如95%乙腈）。请参阅相关章节。
b. pH范围
ACQUITY BEH色谱柱的推荐操作pH范围如下：采用BEH C18、BEH C8和BEH苯基填料为1~12；采用BEH Shield RP18和BEHAmide填料为2~11；采用BEH HILIC填料为1~9。表2列出了常用的缓冲盐和添加剂。此外，柱寿命将根据操作温度、使用的缓冲盐类型和浓度而有所不同。例如，在高温下使用pH值为8的磷酸盐缓冲液会缩短色谱柱寿命。
c. 溶剂
为了保持理想的色谱柱性能，请使用高品质色谱级溶剂。所有水相缓冲盐在使用前都应使用0.2 μm滤膜过滤。推荐使用PallGelman Laboratory Acrodisc®过滤器。含有悬浮颗粒物的溶剂
通常会堵塞色谱柱入口筛板，这会导致操作压力增大，性能变差。有关详细信息，请参阅相关章节。
d. 压力
ACQUITY BEH色谱柱能够承受高达18000psi（1241 bar或124 MPa）的操作压力。
注：在压力、pH和/或温度的极值下运行会缩短色谱柱使用寿命。
e. 温度
为了改善选择性、降低溶剂粘度和提高传质速率，ACQUITYBEH色谱柱的推荐操作温度范围为20 °C~90 °C。在高pH条件下操作时，建议降低操作温度以延长色谱柱使用寿命。在较高
温度下（如70 °C以上）运行也可能缩短色谱柱使用寿命。在HILIC分析中，BEH Amide色谱柱可以在高pH值和高温条件下使用，不会出现问题（请参阅“BEH Amide色谱柱入门”章节的推荐条件）。
表2.使用ACQUITY BEH色谱柱时的推荐缓冲盐
|
添加剂/缓冲液 |
pK, |
缓冲液范围 |
挥发性(±1个pH单位) |
能否用于质谱 |
注释 |
|
TFA |
0.3 |
— |
挥发性 |
可用 |
离子对添加剂，能抑制MS信号， 在0.02%~0.1%范围内使用。 |
|
乙酸 |
4.76 |
— |
挥发性 |
可用 |
与醋酸铵-起使用时缓冲能力非常强。 在0.1%~1.0%范围内使用。 |
|
醋酸盐(NH3 CH3CO2) |
3.75 |
— |
挥发性 |
可用 |
与甲酸铵-起使用时缓冲能力非常强。 在0.1%~ 1.0%范围内使用。 |
|
甲酸盐(NH4HCO2) |
4.76 |
3.76-5.76 |
挥发性 |
可用 |
在1~10 mM范围内使用。 注:其钠盐或钾盐无挥发性。 |
|
磷酸盐1 |
3.75 |
2.75-4.75 |
挥发性 |
可用 |
在1~10 mM范围内使用。 注:其钠盐或钾盐无挥发性。 |
|
磷酸盐2 |
2.15 |
1.15-3.15 |
非挥发性 |
不可用 |
常用的低pH缓冲液，具有良好的UV透光性。 |
|
磷酸盐3 |
7.2 |
6.20-8.20 |
非挥发性 |
不可用 |
pH值大于7时，需要降低柱温/浓度并使用保护柱，以便尽可能延长使用寿命。 |
|
4-甲基吗（ma）啡啉 |
12.3 |
11.3-13.3 |
非挥发性 |
不可用 |
pH值大于7时，需要降低柱温/浓度并使用保护柱，以便尽可能延长使用寿命。 |
|
氨水(NH4OH) |
~8.4 |
7.4-9.4 |
挥发性 |
可用 |
通常在10mM或更低浓度下使用。 |
|
碳酸氢铵 |
9.2 10.3(HCO3-) 9.2 (NH4+) |
8.2-10.2 8.2-11.3 |
挥发性 挥发性 |
可用 可用 |
在5~10mM范围内使用(进行MS分析时，需保持源温度> 150°C)。用氨水或醋酸调节pH值。pH=10时具有良好的缓冲容量。 注:请使用碳酸氢铵(NH,HCO),而不是碳酸铵(INH4)2CO3)。 |
|
醋酸铵 |
9.2 |
8.2-10.2 |
挥发性 |
可用 |
在1~10 mM范围内使用。 |
|
甲酸铵 |
9.2 |
8.2-10.2 |
挥发性 |
可用 |
在1~10 mM范围内使用。 |
|
硼酸盐 |
9.2 |
8.2-10.2 |
非挥发性 |
不可用 |
需要降低柱温/浓度并使用保护柱，以便尽可能延长使用寿命。 |
|
CAPSO |
9.7 |
8.7-10.7 |
非挥发性 |
不可用 |
两性离子缓冲液，兼容乙腈，在1~10 mM范围内使用。气味小。 |
|
甘氨酸 |
2.4, 9.8 |
8.8-10.8 |
非挥发性 |
不可用 |
两性离子缓冲液，相较于硼酸盐缓冲液更有助于延长色谱柱寿命。 |
|
1-甲基哌（pai）啶 |
10.2 |
9.3-11.3 |
挥发性 |
可用 |
在1~10 mM范围内使用。 |
|
CAPS |
10.4 |
9.5-11.5 |
非挥发性 |
不可用 |
两性离子缓冲液，兼容乙腈，在1~10mM范围内使用。气味小。 |
|
三乙胺(用作醋酸盐) |
10.7 |
9.7-11.7 |
挥发性 |
可用 |
在0.1%~1.0%范围内使用。仅当使用乙酸滴定时具有挥发性(使用盐酸或磷酸滴定时无挥发性)。在DNA分析(pH 7~9)中用作离子对试剂。 |
|
吡咯烷 |
11.3 |
10.3-12.3 |
挥发性 |
可用 |
温和型缓冲液，可延长柱寿命。 |
注：在pH、温度和/或压力的极值下运行会缩短色谱柱使用寿命。
