Inertsil CN-3色谱柱操作说明
1.色谱柱信息
Inertsil CN-3液相色谱柱是在高纯度硅胶基质上键合氰丙基的色谱柱，可用于正反相分离模式。用于反相分离模式时，由于含有碳氮三键，提供π电子作用力，因此具有与C18不同的选择性，可以用于非极性至极性例如药物、多肽、氨基酸、核酸和寡糖、有机酸的分离。Inertsil®CN-3液相色谱柱从硅胶基质的合成，到化学处理和装填后的性能检测，都是在本公司严格的产品控制下进行，因此不同批次的柱与柱之间具有优异的重现性;通过独有的装填技术填装的氰基柱柱床密度均一稳定，从而确保色谱柱具有高柱效。
为了能长期保持Inertsil®CN-3液相色谱柱的优越性能和正确的使用色谱柱，在使用色谱柱之前请仔细阅读本说明书。
2.使用前的检查与须知事项
●检查包装箱的外观有无异常。
●打开包装，检查色谱柱的填料名称、尺寸规格、连接形式是否相符。
●色谱柱中封存流动相为正己烷/乙醇=98:2，v/v。
3.色谱柱填料规格
4.色谱柱安装与操作
色谱柱在运输过程中，两端用堵头密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先请确保系统中的溶剂和液相柱中封存溶剂是互溶的。如果不能互溶，请采用一种能够与系统及色谱柱都能互溶的溶剂(e.g.异丙醇)对系统进行充分过渡之后再将色谱柱连接到系统中，并注意流动相的方向要与柱上标记的方向保持一致。我公司提供的常规液相色谱柱标准接头型式为
1/16英寸Waters接头螺丝型(如下左图)，同时还有耐高压液相系统的UP型(如下右图)(目前CN-3柱暂不提供UPLC柱)。如果需要其他接头形式请另行咨询。
色谱柱连接好之后，请确认无漏液现象之后再进行后续操作。
新的CN-3柱是保存在正己烷/乙醇(98:2，v/v)的溶液中，在储存和运输过程中，硅胶填料可能会干涸,如果用于正相分离模式，正相柱的平衡时间一般较长,直接用正己烷/乙醇(98:2，v/v)冲洗50倍柱体积活化，流速从0.1mL/min缓慢上升到最佳流速，然后用流动相平衡之后再进样分析;如果用在反相系统中分离，推荐用至少50倍柱体积异丙醇过渡(注意接色谱柱之前，用二通代替色谱柱连接系统，用异丙醇将系统包含进样器部分彻底清洗，除水完全之后，再连接色谱柱)，再用纯的乙腈冲洗20倍柱体积对色谱柱进行平衡，流速从0.1mL/min缓慢上升到最佳流速，然后用不含缓冲盐的流动相进行平衡20倍柱体积，再用流动相平衡，待压力和基线稳定之后，再进样分析。(如果在活化过程中即发现压力和基线不正常时，请及时联系我公司工程师处理。)
5.样品与流动相
为避免色谱柱堵塞，所有样品及溶剂，包括缓冲溶液在内，在使用前必须用0.45μm或者0.22 μm的滤膜过滤。在正相色谱中，固定相的水分含量常常是影响选择性的关键因素，大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分(正己烷20℃水分含量是0.0111% w/w)，如发现色谱柱保留性能发生变化，可用流动相低流速长时间充分平衡。
6.色谱柱的保养
●pH CN-3柱可在pH2~7.5范围内使用，为保持色谱柱良好的寿命，请避免较强的酸或碱性样品或者流动相进入色谱柱。
●耐压 常规柱耐受压力为20MPa，HP系列耐压为50MPa，但是正常的压力建议控制在耐受压力的2/3以下。长时间在高压下运行会对色谱柱造成难以修复的损害，因此系统压力升高之后，建议尽快排查系统，如果是色谱柱压力升高，请及时采用适当溶剂冲洗色谱柱。
●温度 最高操作温度为60℃，长时间在高温下操作会显著降低色谱柱寿命。
●冲洗
正相模式清洗步骤:1.每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速;2.先用10倍柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等冲洗色谱柱;3.用50柱体积的诸如乙酸乙酯，二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂冲洗色谱柱。
反相模式清洗步骤:1.如果是采用缓冲盐流动相的情况下，做样之前请务必用比缓冲盐稍高比例的水充分过渡，然后再用流动相平衡;2.每天做样完毕之后，应充分冲洗色谱柱，首先用稍高比例的水相冲洗，例如乙腈/水=10:90 (v/v)冲洗2o倍柱体积，然后用乙腈/水=95:5(v/v)冲洗20倍柱体积，然后保存在这个流动相下。
●储存
色谱柱长期不用，建议冲洗方法完成之后，正相分离模式保存在与出厂封存溶剂相同的流动相中;HILIC 分离模式保存在存纯乙腈中，之后卸掉色谱柱，两端用堵头密封，并放在温度变化小的场所。
