ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier BEH色谱柱的操作使用

a. 样品前处理

1. 样品中的杂质往往会污染色谱柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有适合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色谱柱或Sep-Pak™小柱净化样品。

2. 为获得理想峰形和灵敏度，优先选用运行分析时拟用的流动相或比它更弱的流动相来制备样品。除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性配件包，否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。

3. 如果样品不溶于流动相，请确保样品、溶剂和流动相可以混溶，以避免样品和/或缓冲盐析出。

4. 用0.2μm滤膜过滤样品，去除颗粒物质。如果用于溶解样品的溶剂含有机溶剂（如乙腈、甲醇等），请确保滤膜材料不溶于该溶剂。请联系滤膜生产商了解滤膜的溶剂兼容性。

或者，可以考虑在8000 rpm下离心样品溶液20 min，然后将上清液转移至适当的样品瓶中。

5. 对于亲水作用色谱(HILIC)分离，样品必须用高百分比的有机溶剂制备（例如95%乙腈）。请参阅“BEH HILIC色谱柱入门”或“Amide色谱柱入门”章节获取详细信息。

b. pH范围

  ACQUITY BEH色谱柱的推荐操作pH范围如下：采用BEH C18、BEH C8和BEH苯基填料为1~12；采用BEH Shield RP18和BEHAmide填料为2~11；采用BEH HILIC填料为1~9。表2列出了常用的缓冲盐和添加剂。此外，柱寿命将根据操作温度、使用的缓冲盐类型和浓度而有所不同。例如，在高温下使用pH值为8的磷酸盐缓冲液会缩短色谱柱寿命。

c. 溶剂

  为了保持理想的色谱柱性能，请使用高品质色谱级溶剂。所有水相缓冲盐在使用前都应使用0.2μm滤膜过滤。推荐使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®过滤器。含有悬浮颗粒物的溶剂通常会堵塞色谱柱入口筛板，这会导致操作压力增大，性能变差。有关详细信息，请参阅第VI节。

d. 压力

注：在压力、pH和/或温度的极值下运行会缩短色谱柱使用寿命。

e. 温度

  为了改善选择性、降低溶剂粘度和提高传质速率，ACQUITY BEH色谱柱的推荐操作温度范围为20°C~90°C。在高pH条件下操作时，建议降低操作温度以延长色谱柱使用寿命。在较高温度下（如70 °C以上）运行也可能缩短色谱柱使用寿命。在HILIC分析中，BEH Amide色谱柱可以在高pH值和高温条件下使用，不会出现问题（请参阅“BEH Amide色谱柱入门”章节的推荐条件）。

表2.使用ACQUITY BEH色谱柱时的推荐缓冲盐