ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier BEH色谱柱的清洗、再生和存放
a. 清洗与再生
如果发生峰形改变、谱峰分叉、出现肩峰、保留时间改变、分离度变化或柱压升高,说明色谱柱可能已被污染。通常情况下,用纯有机溶剂进行冲洗(小心避免缓冲盐出现析出)就足以去除污染物。如果冲洗不能解决问题,可采用以下清洗和再生步骤。
根据样品和/或您认为污染色谱柱的物质的性质,选择与之匹配的常规清洗方法(见表3)。
请使用20倍柱体积的溶剂冲洗色谱柱。升高柱温可提高清洗效率。如果清洗和再生之后色谱柱性能仍然很差,请致电当地的沃特世办事处获得更多支持。
用50:50乙腈/水冲洗BEH HILIC色谱柱,去除极性污染物。如果此冲洗操作不能解决问题,可用5:95乙腈:水冲洗色谱柱。
要清洗BEH Amide色谱柱中的极性污染物,请运行10 min内水从0增加到100%的梯度。请注意,随着水的比例上升,柱压也将迅速增大。在含水量大于60%的条件下运行时,请降低流速。必要时请重复该操作。
表3.ACQUITY BEH色谱柱的推荐pH和温度限值
表4.反相色谱柱清洗顺序
* 在使用THF或正己烷之前,确保系统与这些溶剂兼容。只有在利用纯反相有机溶剂(如乙腈)无法清洗色谱柱时,方可考虑使用诸如THF或正己烷之类的溶剂。降低流速,使用较低的操作温度并尽量减少系统与THF和/或正己烷的接触。
** 使用低有机溶剂含量的溶液,以避免出现缓冲盐析出。
b. 存放
如果反相色谱柱需要在室温下存放超过四天,应将其保存于100%乙腈中。对于高温应用,请在使用后立即使用100%乙腈保存色谱柱,以便尽可能延长色谱柱使用寿命。切勿使用
缓冲盐保存色谱柱。如果流动相中含有缓冲盐,则先用10倍柱体积(常规色谱柱体积请参见表1)的HPLC级水冲洗反相ACQUITY BEH色谱柱,再用100%乙腈替换柱内的水,然后
储存。如果不执行这个中间步骤,在引入100%乙腈时,色谱柱内可能会出现缓冲盐析出。BEH Amide色谱柱在保存100%乙腈前先进行梯度冲洗至100%乙腈以将所有水相溶剂从柱中冲洗干净。将色谱柱完全密封,防止柱床因溶剂蒸发而变干。
如果BEH HILIC色谱柱需要存放超过四天,应将其保存于95:5乙腈:水中。切勿使用缓冲液保存色谱柱。如果流动相中含有缓冲盐,则用10倍柱体积的95:5乙腈:水冲洗色谱柱(常规色谱柱体积请参见表1)。
注:如果色谱柱运行了含甲酸盐(如甲酸铵、甲酸等)的流动相,并且之后使用100%乙腈进行冲洗,那么在重新安装色谱柱并再次运行含甲酸盐的流动相时,柱平衡花费的时间可能略长。