杜马斯定氮法(DumasMethod)在测定蛋白质时,实际上是通过测定样品中的氮含量来间接计算蛋白质的含量,因为蛋白质是由氨基酸组成的,而氨基酸都含有氮元素。这种方法基于氮元素在高温燃烧条件下转化为氮气(N₂)的原理,随后通过检测生成的氮气量来确定氮元素的含量,并*终计算出蛋白质的含量。
1.样品准备:
将待测饲料样品进行适当的前处理,如研磨成细粉、干燥至恒重等,以确保样品均匀且易于燃烧。
2.燃烧分析:
将处理好的样品置于杜马斯定氮仪的燃烧管中,在纯氧或富氧环境中进行高温燃烧(通常温度超过1000°C)。
燃烧过程中,样品中的有机物质(包括蛋白质)被氧化分解,氮元素以氮气(N₂)的形式释放出来。
3.气体分离与检测:
燃烧产生的混合气体(包括氮气、二氧化碳、水蒸气等)通过一系列的气体分离装置,如冷却管、干燥剂等,以去除干扰气体(如二氧化碳和水蒸气)。
纯净的氮气随后被引入检测器(如热导检测器TCD或质谱仪MS)中进行定量分析。
4.氮含量计算:
根据检测器测得的氮气量,结合仪器的校准曲线或计算公式,可以计算出样品中氮元素的含量。
蛋白质含量计算:
利用氮含量和蛋白质的平均含氮量(通常为6.25%,这是一个基于常见蛋白质的近似值)之间的关系,计算出样品中的蛋白质含量。
计算公式为:蛋白质含量(%)=氮含量(%)×6.25。
注意事项:
1.样品的前处理对测定结果有很大影响,必须确保样品均匀且完全燃烧。
2.燃烧过程中需要严格控制温度和氧气流量,以确保氮元素完全转化为氮气。
3.气体净化步骤非常关键,必须彻底去除干扰物质,以避免对测定结果产生误差。
4.测定过程中应使用标准物质进行校准,以确保测定结果的准确性。
5.杜马斯定氮法具有操作简便、快速、准确等优点,因此在饲料、食品、化肥等领域得到了广泛应用
需要注意的是,虽然杜马斯定氮法是一种广泛应用的蛋白质测定方法,但它也存在一定的局限性。例如,它无法区分样品中的蛋白质氮和非蛋白质氮(如硝酸盐、亚硝酸盐中的氮),因此在某些情况下可能会导致蛋白质含量的高估或低估。此外,不同的蛋白质其含氮量也可能有所不同,因此在实际应用中可能需要根据具体情况对平均含氮量进行适当调整。
意大利VELP杜马斯元素分析仪的优势:
1.双载气系统,可选择氦气和氩气作为载气,无缝选择氩气,可以降低与氦气相关的成本。2.可在无参考气体的情况下工作,确保了准确性和**度。
2.仪器由DUM SoftTM软件驱动,只需3-4分钟就能产生N/蛋白质结果,完全不需要值守,并且支持云计算。3.可以同时装载不同基质的固体、半固体和液体样品。4.市场上*低的氦气LOD为0.001mgN,RSD低于0.5%(EDTA),保证了高精度的结果和出色的重复性。5.免维护的DriStepTM疏水阀是一种物理性的疏水阀,可以去除99%的水,减少了化学品的成本。
6.NDA702易于安装,结构极为紧凑,可节省实验室宝贵的工作台空间。与湿化学N/蛋白质测定方法相比,VELP Duma定氮技术极大地减少了浪费。