多光子激光扫描显微镜的优点及缺点
多光子激光扫描显微镜是建立在激光扫描显微镜技术基础上的实验方法,在三维观察上提供了更优良的光学切片能力。多光子荧光激发方法使用长波长的红光或近红外光采集标本高分辨率荧光图像,对活性标本的杀伤极小,因此适用于活细胞成像,尤其是厚的活组织如脑片、胚胎、整个器官甚至整个机体的成像研究。
优点如下:
1、利用红光或红外光激发,光散射小(小粒子的散射与波长的四次方的成反比)。
2、不需要针孔,能更多的收集来自成像截面的散射光子。
3、针孔不能区分由离焦区域或焦点区发射出的散射光子,多光子在深层成像信噪比好。
4、单光子激发所用的紫外或可见光在光束到达焦平面之前易被样品吸收而衰减,不易对深层激发。
5、在生物显微镜观察方面,*先考虑的是不损坏生物本身的活性状态,维持水分、离子浓度、氧和养分的流通。在光观察场合,无论是热还是光子能量方面都必须停留在细胞不受损伤的照射量、光能量内。
6、多光子显微镜还具有很多优点。如三维分辨率、深度侵入、在散射效率、背景光、信噪比、控制等方面,有以往激光显微镜不具备或具有无法比拟的超越特性。
多光子共焦激光扫描显微镜已延伸到各个研究和应用领域.,它能对处在自然状态下的样品进行三维无损观察 ,并能提高系统的分辨率和信噪比.利用多光子激发后材料性质的变化 ,还可以实现三维高度数据存储和三维任意方向的微细加工 ,具有很高的应用价值. 可以相信 ,随着与多光子共焦显微镜相关的机械、材料、激光技术等的进一步发展 多光子共焦激光扫描显微镜将得到更大的发展和更广泛的应用.
缺点如下:
1、只能对荧光成像。
2、如果样品包括能够吸收激发光的色团,如色素,样品可能受到热损伤。
3、分辨率略有降低,虽然可以通过同时利用共焦的小孔得到改善,但是信号会有损耗。
4、受昂贵的超快激光器限制, 多光子扫描显微镜的成本较高。