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基因敲除小鼠模型设计中,2A和IRES的选择有何区别-多功能混匀仪技术文章
基因敲除小鼠模型设计中,2A和IRES的选择有何区别-多功能混匀仪技术文章
基因敲除小鼠模型设计中,2A和IRES的选择有何区别-多功能混匀仪技术文章
IRES的优缺点:
优点:IRES被放置于两个ORF之间的时候,可以同时表达这两个ORF。由于两个ORF分别有自己的起始密码子和终止密码子,所以会翻译两个独立的、没有经过修饰的蛋白。
缺点:IRES的存在有时候会影响mRNA的结构,同时由于IRES和mRNA的5‘CAP对核糖体/或翻译起始复合物的结合力不同,IRES后面的ORF翻译蛋白的水平有可能与IRES前面的ORF蛋白水平不一致。有的时候前面的ORF表达很好,但后面的ORF表达水平不高;有的时候后面的ORF和/或IRES会影响前面ORF的表达,甚至前面的ORF根本不表达。
2A的优缺点:
优点:两个基因(ORF)通过2A多肽链连接成为一个ORF,mRNA翻译成一个融合蛋白,但这两个融合蛋白会被识别2A的蛋白酶切成两个蛋白。这两个蛋白的摩尔比理论上是1:1。
缺点:2A是一个大约23个氨基酸的多肽。蛋白酶切割会发生在2A多肽C端的甘氨酸(G)和脯氨酸(P)之间。所以,前一个蛋白的尾巴上会留下一个20多个氨基酸的多肽。后面一个蛋白的N端会留下一个多余的脯氨酸。尤其是**个蛋白,如果是一个小分子(比如分泌型的细胞因子),可能其功能会受到这20多个多肽的影响。
转自生命科学论坛
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