您好,欢迎来到仪表展览网!
请登录
免费注册
分享
微信
新浪微博
人人网
QQ空间
开心网
豆瓣
会员服务
进取版
标准版
尊贵版
|
设为首页
|
收藏
|
导航
|
帮助
|
移动端
|
官方微信扫一扫
微信扫一扫
收获行业前沿信息
产品
资讯
请输入产品名称
噪声分析仪
纺织检测仪器
Toc分析仪
PT-303红外测温仪
转矩测试仪
继电保护试验仪
定氮仪
首页
产品
知识
专题
词条
品牌
资料
展会
成功案例
网上展会
词多 效果好 就选易搜宝!
莱因特电子系统(上海)有限公司
新增产品
|
公司简介
注册时间:
2013-08-12
联系人:
电话:
Email:
首页
公司简介
产品目录
公司新闻
技术文章
资料下载
成功案例
人才招聘
��誉证书
联系我们
产品目录
VITL系列
当前位置:
首页
>>>
技术文章
>
技术文章
关于酶切的一点经验-多功能混匀仪技术文章
关于酶切的一点经验-多功能混匀仪技术文章
关于酶切的一点经验-多功能混匀仪技术文章
酶切反应系统包括:DNA,酶,buffer,**水。
不同公司的酶和buffer系统是不同的,所以一个反应应该用同一个公司的酶和buffer(常识)。NEB和promega的酶都不错的,我们常用的酶是NEB(new england biolabs)公司生产的酶。使用前应该阅读NEB公司的产品目录和该酶的使用说明。下面分几个方面简要说明:
1,DNA,自己制备的DNA,样品中不应该有酚,氯仿,酒精,EDTA,盐离子等的污染,这些东西会影响酶的活性。这个问题应该在提质粒阶段避免。
2,酶,酶量并不是越大越好,酶体积不应该超过总反应体积的1/10。(因为酶是储存在50%甘油中的,而反应体积中甘油的浓度超过5%就会使酶出现星号活性,即切割不应该切的位置)。如果切点位于线状质粒两端,酶切效率将会大大降低。
3,buffer,不同的酶配有不同的buffer,产品目录和酶的使用说明中会说明该酶用哪种buffer,有些buffer中需要另外添加BSA,不要忽略了哦。
4,反应体积,通常1到几微克DNA的反应体积可以控制在50到100微升,用20单位的酶来切。
5,反应条件,大多数酶都是37度半小时以上。
6,电泳检测。条带不清楚跟电泳也有关系。首先是胶的浓度,不同浓度的胶适合分离不同大小的片段,这个你看看分子克隆之类的书,一般来说,1%的gel可以用于500bp-6,7kb的片段分离。其次是电压,电压不能太高。这些你肯定都很清楚,我就不赘述了。还有如果载体很大,而切下来的片段很小,那么切下来的片段就会因为质量小而不容易看清楚,比如从10kb的载体上切下来200bp的片段这种情况,解决方法就是多切一些,再点marker仔细看。
7,双酶切。因为不同的酶需要不同的buffer,所以有两种情况:1)两种酶是同样的buffer。尽量用同一个公司的酶,这样就跟单酶切操作差不多,可以同时加入两种酶,注意事项是体积和酶量。2)两种酶是不同的buffer,先用一种buffer离子浓度底的酶切,电泳检测,单酶切开以后,将产物抽提,沉淀,加入离子浓度高的buffer再酶切。
转自生命科学论坛
上一篇:
转染技术要点及转染试剂的选择 -多功能混匀仪技术文章
下一篇:
测序技术的回顾与发展-多功能混匀仪技术文章
若网站内容侵犯到您的权益,请通过网站上的联系方式及时联系我们修改或删除