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公司PCR服务实验技术经验之谈 -多功能混匀仪技术文章
公司PCR服务实验技术经验之谈 -多功能混匀仪技术文章
公司PCR服务实验技术经验之谈 -多功能混匀仪技术文章
主题1. 实现高效PCR扩增的*简单方法:
针对待扩增的基因序列,按照普遍遵循的法则设计两条上游和两条下游引物(四条引物Tm值相当),在常规反应条件和反应程序下,四条引物组成四种引物对分别同时扩增模板,PCR产物电泳结果条带*亮或实时PCR中Ct值*靠前的引物对即为高效引物组合,选择该对引物进行PCR扩增一般无需反应条件的优化就可实现高效扩增,省去实验优化的时间和成本。
主题2. 实现多重PCR扩增的策略:
A.设计3’端富含AT的引物;
B.设计高Tm值引物,选择较高的退火温度(62-65度);
C.选择较短扩增子(120-180nt),选择较短的延伸时间(8-10秒);
D.引物对依次加入到反应体系中,淘汰掉不合适的引物对;
E.其他原则:同单重PCR。
主题3. 如何实现低成本的荧光定量PCR:
A.检测样本数少于200,采用SYBRGreen染料法;
B.检测样本数多于200,采用探针法(如:Taqman探针、分子信标等);
C.选择200ul PCR单管而不是八联管、96孔板;
D.参照“实现高效PCR扩增的*简单方法”筛选合适的引物对。
转自生命科学论坛
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