近两年来,在RNA方面的科学论文及报道爆Zha性增长,几乎每天都有新的结果涌现。应用RNA对细胞和分子生物学的各个方面的研究非常普遍。mRNA(信使RNA)代表了基因表达的水平。mRNA的分离、定量和检测极为重要。而总RNA的分离通常是决定实验(Northern Blotting、斑点杂交、polyA筛选、mRNA纯化、体外翻译、RNase保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验)结果的关键。
RNA常见问题:
常见问题
可能原因
产率低
含有裂解液的样品经匀浆混匀后未在室温静置,或静置的时间不足5分钟
RNA不完全溶解
三相分离时,吸取上清液不完全
A260/A280<1.65
TRIzol加量太少,造成蛋白质变性不充分
三相分离后,吸取上清液时不小心接触蛋白层造成污染
RNA降解
使用的组织材料不够新鲜
提取RNA时使用的试剂及器材中有RNase污染
提取的组织材料中含有大量的RNase
裂解组织或细胞使用的TRIzol量偏少
DNA污染
使用的组织材料中含有大量的有机溶剂(如:乙醇、异丙醇等)、高浓度的Buffer、碱性溶剂等
多糖的污染
多糖的理化学性质与RNA十分接近,因此很难将其从RNA中除去