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采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因**研究-混匀仪技术文章
采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因**研究-混匀仪技术文章
采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因**研究-混匀仪技术文章
RNA 干扰
(RNA interference, RNAi)是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因**等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶(FAK)是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶,参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中起重要作用,在多种肿瘤细胞系中均观察到了FAK 的高表达现象,这表明了FAK 可能是一种潜在的肿瘤**的靶点。许多研究小组报道了在体外多种细胞系转染FAK 反义RNA 或 RNAi 的研究,观察到FAK 反义RNA 或 RNAi能有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。然而至今还没有关于在体内的肿瘤中,进行以FAK 为靶点的**研究。由于体内生理的复杂性,体外的结果并不能代替体内的现象,为此有必要开展体内研究,为临床**提供必要的基础。因而,我们构建了以FAK 为靶向的RNAi 表达质粒。首先,在体外采用
GenEscort™ Ⅲ
试剂转染该质粒能有效抑制了B16F10 细胞中的FAK水平。同时,我们还转染了FAK的显性负作用的变体FRNK,在体外FAK 的基因沉默和FRNK 都能显著的抑制B16F10 肿瘤细胞的增殖和迁移。然后在体内实验中,我们采用了原位生长肿瘤模型和足掌主动转移模型来评价FAK 作为肿瘤**靶点的效果。结果显示在体内模型中,与对照组相比,两种方法都可以明显抑制原位肿瘤的生长,并阻止B16F10 细胞向引流**结转移,充分说明FAK 在黑色素瘤中可以做为肿瘤**靶点,能够有效阻止和抑制肿瘤的主动转移,这一结果将为临床肿瘤的**提供新的策略。
本实验的
GenEscort™ Ⅲ
基因转染试剂发挥了重要的工具作用,这种非病毒载体相对于病毒载体有许多优点,因而被广泛使用,近年来对 PEI 的改性,已成为研究的热点,以便使其有更好的转染效率和更小的毒性。
GenEscort™ Ⅲ
是一种多用途的转染试剂,该试剂由可生物降解的超高分枝的PEI衍生物与其它组分复合而成。对各种贴壁细胞有较高的转染效率、也适用于转染悬浮细胞和原代细胞。可用于转染大分子DNA、小分子寡核苷酸和siRNA等。特别适用于携带质粒或DNA、RNA片段用于注射小鼠的静脉、皮下和腹腔等部位进行体内动物实验。
目录:
一、
实验材料和方法
1
、药品试剂与质粒
2
、
FAK
干扰质粒
psiFAK
的构建
3
、
RNA
提取
4
、
RT-PCR
5
、
Western blotting
6
、细胞转染实验
7
、
EGFP
的表达及荧光显微镜观察和流式细胞仪分析
8
、细胞周期的检测
9
、细胞迁移实验
10
、
MTT
实验
11
、伤口**实验
12
、**组化方法
13
、体内肿瘤主动转移实验
14
、体内背部肿瘤生长实验
二、
结果
1
、
FAK
干扰质粒
psiFAK
2
、转染试剂
GenEscort™ Ⅲ
的转染效率
3
、转染
psiFAK
质粒能抑制
B16F10
细胞中
FAK
基因表达
4
、
psiFAK
及
pKH3-FRNK
均可以抑制肿瘤细胞
B16F10
的增殖
5
、
psiFAK
和
pKH3-FRNK
显著地削弱了
B16F10
细胞的迁移能力
6
、
psiFAK
和
pKH3-FRNK
瘤内注射抑制
FAK
功能
7
、
psiFAK
和
pKH3-FRNK
抑制体内肿瘤生长
8
、
psiFAK
和
pKH3-FRNK
抑制
B16-F10
细胞在小鼠体内的转移
转自生命科学论坛
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非编码RNA如何帮助蛋白质寻找特异底物分子-混匀仪技术文章
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