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如何防止RNA酶污染-混匀仪技术文章
如何防止RNA酶污染-混匀仪技术文章
如何防止RNA酶污染-混匀仪技术文章
在实验中,一方面要严格控制外源性RNA酶的污染;另一方面要*大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压**等。
外源性的RNA酶存在 于操作人员的手汗 、唾液等,也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染 器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。
一、防止RNA酶污染 的措施
1.所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。
2.塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用)。
3.有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水 冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2 O2 室温10min,然后用0.1% DEPC水冲洗,晾干。
4.配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC,在37℃处理12h以上。然后用高压**除去残留的DEPC。不能高压**的试剂,应当用DEPC处理过的无菌双蒸水 配制,然后经0.22μm滤膜过滤**。
5.操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。
6.设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用。
二、常用的RNA酶抑制剂
1.焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合 使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。
2.异硫氰酸胍 :目前被认为是*有效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用。
3.氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,它和RNA酶结合 形成过渡态类物质,几乎能完全抑制RNA酶的活性。
4.RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin ):从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin 是RNA酶的一种非竞争性抑制剂,可以和多种RNA酶结合,使其失活。
5.其它:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用
转自生命科学论坛
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