根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。叶绿素测定仪的工作原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度。根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL 式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的大吸收峰。在400-700nm的光辐射（PAR）是光合作用所需的主要的能量。大部分叶片接受的光被吸收用来进行光化学过程。然而，有一小部分的光从反应中心以更长波长的光重新发散出去，这些被重新发散出的光称为叶绿素荧光。测量很简单，先将叶片预黑暗处理一段时间，然后再在饱和光强下暴露短暂的时间，测量这段时间内荧光强度随时间的变化的动力学感应曲线。曲线的形状和曲线上重要的瞬时值可以用来指示环境胁迫对光合器官的损伤。通常，有意义的参数是Fv/Fm，称为光化学效率。
测量方法有两种： 1.单手操作电池操作的OP-30P，是内置分析探头的叶绿素荧光仪，这意味着操作仪器只需单手即可完成。轻巧的叶夹用来进行在荧光测量前的暗适应过程，这些无损型叶夹可以在非常多重植物样品上使用。测量时，将分析探头置于叶夹上，打开叶夹遮光片，将暗适应后的部位暴露在由660nm固态光源的激发光下。诱导出的荧光由>700nm PIN光二极管测量，激发强度和实验间隔可由用户自行选择。新型选择性检测系统能比以往更地测定Fo和快速动力学区域（荧光诱导曲线）。 2.快速田间测量显示仪器设计用来快速测量显示经暗适应后的Fv/Fm 比值。OP-30P是研究人员进行基本植物胁迫分析的理想选择。标准荧光参数显示在控制单元的大面积液晶显示屏上，内部内存可以存储5000组数据和32条实验迹线，时间和日期会自动储存。通过主机下方的单键可以对样品进行快速测量和数据存储。荧光数据的精度可由非常高的取样频率（10-100000个点/秒）来确保。
测量参数包括Fo、Fv、Fm和Fv/Fm。
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