对于信号转导科研来说,抗酪氨酸磷酸化抗体的出现是一个意义重大的事件。在没有抗酪氨酸磷酸化抗体之前,蛋白质和酶的酪氨酸磷酸化只能通过非常危险的并且很费时的放射性实验来检测。而利用抗酪氨酸磷酸化抗体,则可以通过Western Blot或其它**学方法轻松地检测到磷酸化信号。常规的检测方法包括:用抗酪氨酸磷酸化抗体在Western Blot上检测内源或外源表达的磷酸化蛋白。如果目标蛋白的含量较低,也可利用**沉淀的方法先富集发生磷酸化的酪氨酸蛋白,再检测目标蛋白的水平。抗酪氨酸磷酸化抗体也常用于检测在不同处理的条件下,细胞内总的酪氨酸磷酸化水平的变化情况,作为许多细胞生物现象的一个重要指标。 我们都知道如果需要检测某一个目标蛋白的某一特定位点的磷酸化状态,可以选用该蛋白特定位点的磷酸化特异性抗体。但由于我们研究的通常是新的磷酸化位点,或者这些蛋白特定位点的磷酸化抗体效果不够好,我们不得不自己制备磷酸化抗体。如果大家自己制备过磷酸化抗体,就会知道磷酸化抗体的制备比一般抗体的制备更加困难,而且浪费大量宝贵时间。现在国外的科学家发现可以使用通用型的磷酸化抗体,只要巧妙的设计实验,也可以达到同样的检测目的。以Yuan的文章为例,他们需要检测BCR-ABL的磷酸化,但他们没有特异性的磷酸化抗体。他们首先使用了抗c-ABL的抗体和蛋白G-琼脂糖珠子来**沉淀富集BCR-ABL蛋白,然后再通过Western-Blot和4G10通用型酪氨酸磷酸化抗体(pan-phosphotyrosine)来鉴定BCR-ABL蛋白的酪氨酸磷酸化水平。另外一组以Clemens为首的科学家,则利用抗Dock蛋白抗体先**共沉淀了DACK蛋白,再用4G10酪氨酸磷酸化抗体来检测DACK蛋白和DSH3PX1蛋白的酪氨酸磷酸化水平,通过区分这些蛋白的分子量大小,来确认相应的磷酸化条带的蛋白身份。 华东生物器材网http://www.jp1718.com/是上海金鹏旗下网站。本网是专业的生化器材网站,集生产、制造、销售于一体。优势产品有紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、凝胶成像分析系统、低压液相色谱分离仪、自动部分收集器、梯度混合器、旋转蒸发器等生物仪器,是销售生化器材品种**,规模庞大的专业企业。 上海金鹏分析仪器有限公司 http://www.jp1718.com/ 电话: 61425398 36162366 手机: QQ:964122960,765695826, 842727501, 2460311703, 2431022418,170324176 传真: 地址:上海市真陈路1398弄15号 邮编:200444