原位PCR步骤： 1、 预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织37℃ 30min； （5）梯度酒精脱水，室温干燥。 2、原位扩增： （1）切片滴加特异性序列引物30μLPCR扩增反应液，覆盖 硅化盖玻片，石蜡油封边； （2）PCR热循环：94℃，1min；55℃，1min；72℃，1.5min， 共25～30个循环，72℃延伸10min； （3）氯仿洗去盖玻片，4％多聚甲醛后固定10min，梯度酒精 脱水，干燥。 3、原位杂交： （1）加地高辛标记探针的杂交液，98℃变性10min，-20℃ 退火5min，42℃杂交过夜。 （2）杂交后用2×SSC洗涤10min，3次，1×SSC洗涤10min， 3次； （3）缓冲液洗涤10min，3次； （4）加碱性磷酸酶标记的羊抗地高辛抗体复合物，37℃，2h； （5）缓冲液洗涤5min，3次； （6）NBT、BCIP暗处显色，镜下控制，终止显色。 （7）常规脱水：透明、封固。 华东生物器材网（www.jp1718.com）是上海金鹏旗下网站。本网是专业的生化器材网站，集生产、制造、销售于一体。优势产品有紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、凝胶成像分析系统、低压液相色谱分离仪、自动部分收集器、梯度混合器、旋转蒸发器等生物仪器，是销售生化器材品种**，规模庞大的专业企业。 上海金鹏分析仪器有限公司 www.jp1718.com 电话： 61425398 36162366 手机： QQ:964122960，765695826， 842727501， 2460311703， 2431022418，170324176 传真： 地址：上海市真陈路1398弄15号 邮编：200444