聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。经过二十多年的发展应用，如今PCR基因扩增仪，成为医学，农业，食品，医药，检验检疫等领域的实验室常规仪器设备。由于它是新兴科学领域中发展起来的，且应用广泛，于是很多商家大量投入资金，购买新技术，对其进行研发生产。PCR仪核心的经过不断改进，已经越来越完善和智能化，仪器扩增时间从过去小时才可以完成的，缩短到现在只需几十分钟便可完成基因扩增实验。市场上不同厂家生产的PCR仪型号都是自己编写的，仪器的技术参数也各不相同，计算技术参数基本相同，价格却千差万别，于是给用户选择带来了困惑和麻烦。根据本人所接触和使用PCR仪器和毕业后多年从事分子生物器材PCR仪的销售。下面我将自己使用以及客户询问和反馈的信息，作一个PCR仪选购总结分享给广大用户！ 一．PCR仪的种类有： 常规的普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类！ 二．PCR仪的工作模式，功能和应用领域： 1.普通PCR仪：是由主机，加热模块，PCR管，热盖，控制软件组成。根据DNA片段高温解链，降温配对聚合原理，通过循环改变加热模块的温度，微量不易于分辨的的DNA片段进行扩增成大量的DNA片段，从而对其进行分析鉴定。根据需要可结合电泳仪，水平电泳槽，一起应用。主要应用与医学临床检验，食品检测，科研机构，高等院校教学对遗传变异，基因表达等进行研究。 2.梯度PCR仪：工作模式和原理同普通PCR仪一样，它出了又普通PCR仪的功能外还多了一个梯度退火功能。DNA片段的扩增对温度的控制精度要求特别高，不同的DNA片段其退火温度不一样，通过计算DNA片段中的CG碱基的含量只能初步的判断出优退火温度在+5℃范围内，如果用普通PCR仪进行研究，需重复扩增很多次，然后做电泳进行分析来确定优退火温度。而梯度PCR仪则只需要一次就可以完成，在节省了时间的同时提高了实验的可靠性和准确性。主要应用于科研机构，医学临床研究，高等院校，病毒分析，疾控中心等。 3.原位PCR仪：是由主机，加热模块，玻片，热盖，控制软件组成。主要是应用对细胞或组织内的DNA片段进行原位扩增分析-即定位分析。无需将细胞破碎提取DNA，细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响，使用不是很普片。主要用于医学临床研究，如癌细胞等。 4. 定量PCR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统（普通的PCR仪原理相同），一个是荧光检测系统组成。与普通PCR仪，梯度PCR仪相比，无需做电泳分析，实验一步检测完成。根据荧光检测系统的通道不同，可分为单通道，双通道和多通道。多色多通道检测是当今的主流趋势--仪器的激发通道越多，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽；多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品，通道越多，仪器适用范围越宽、性能就更强大，价格也为昂贵。客户可根据自己的需要进行选择，如果没有用到多通道的，建议不要购买，等于购买了无用的功能，建议购买2或者3通道的就已经满足够用。荧光检测系统主要包括激发光源��检测器。激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管LED光源，前者可配多色滤光镜实现不同激发波长，而单色发光二极管LED价格低、能耗少、寿命长，不过因为是单色，需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长。监测系统有超低温CCD成像系统和PMT光电倍增管，前者可以一次对多点成像，后者灵敏度高但一次只能扫描一个样品，需要通过逐个扫描实现多样品检测，对于大量样品来说需要较长的时间。主要应用领域,动物**检测：禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。食品**：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究、大学及研究所等 三、国产和进口PCR仪的比较： 1． 仪器性能：进口PCR以，和国产的PCR仪，在技术和使用性能上基本上没有多大的差别，比如：升降温速率，孔间温差，温度均一性，梯度温度范围，热盖温度等性能指标，外仪器基本达到了相同水平。而其差别主要是在功能上的差别，价格确实相差几倍。 2． 仪器功能：进口和国产仪器主要功能：如保存，过温保护，断电保护，热盖功能等基本上是一样的，只是附带功能上有所差别，比如：进口的显示屏是大型的触摸式荧屏操作，国产的大多是触摸键，荧屏显示操作，进口仪器有的可以升级为荧光定量PCR仪，而国产的目前主要是专用机。而这些仪器附带功能的差别大多都是近两年新推出来的，价格确是相差几倍。有的进口仪器没有这些附带的特殊功能，从性能和功能上比有的等于或低于国产的，比如：上海领成的TCT3型梯度PCR仪成交价格3万以内，进口的同等性能和功能指标的仪器，成交价格却是4-5万元以上。 3． PCR仪的模块：模块是影响实验的主要因素，升温快慢，温度均匀性，直接由它来实现的，而影响实验的主要因素是温度的控制，于是很多商家都从模块上下功夫对其更进。从初的铝合金模块，发展到银模块，但是银容易被氧化，于是就在银槽上镀上一层黄金，产生了镀金银槽。银模块的导热性能的确比铝合金的提高了差不多一倍，缩短了升降温时间，从而缩短了扩增实验，提高了工作效率，快速PCR仪就在这种情况下诞生的。价格却比原来的仪器贵了好几万。比如原来铝合金的成交价是：7万元，换镀金银槽后价格成了9万多。镀金银槽的成本真的有那么贵吗？有的人认为上面的黄金很贵，其实上面的黄金不到1克，现在1克的黄金才200元不到。价格贵算不了什么，只要实用性能高就好。但是升温速率高了，温控精度就会有所下降，这无疑也对实验的特异性扩增带来了影响，如果一个实验非特异性过高，那么实验室失败的。再加上镀金银槽价格昂贵。这也就是市场上使用的大多是铝合金模块较多的原因所在。有些PCR仪设计成可更换模块的PCR仪，价格也比不可更换的要高2万多，而且还要另外花3万购买一个模块才实现模块的更换，作为一个严谨的科研工作者，花这样的多余钱是没有必要的，通常用0.2ml的96孔模块的PCR仪就已经足够了，也是优的选择，因为，0.1ml的量太少不利于控制量，会降低特异性；0.5ml的使用试剂量太大，试剂价格比较昂贵，会增加研究成本，所以0.2ml的模块是优的选择。模块的设计原理，市场上大多进口的梯度PCR仪模块的设计都是使用热能的梯度传递来设计的，而美国ABI的梯度PCR仪是通过单独的每排温度控制来设计的，能实现真正精准的梯度温度设计。如果经费许可以考虑美国ABI的Veriti 96孔梯度PCR仪，经费不足可以购买国产的TCT3型领成梯度PCR仪，这是优的配置选型方案，也是近年来客户使用反应好的配置。 4． PCR仪性能参数的选择技巧：上海领成生物科技的TCT系列梯度PCR仪，工作温度范围：1～99℃，是根据PCR技术的三个热过程：高温模板变性（90℃～95℃）、低温引物退火（42℃～62℃）、适温引物延伸（65℃～75℃）的要求，同时考虑到其他方面试验要求而确定的。而变，退火，延伸三个过程的温度选择取决于温度与时间，取决于酶的活性、引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。在温度范围符合的条件下，接下来就是看仪器的控温精度。如：上海领成生物科技有限公司生产的TC系列PCR扩增仪，BLOCK（模块）升降温速率（Max.）：≥4.0℃/sec、样品升降温速率（Max.）：≥3.5℃/sec、温度显示精度：±0.1℃、温度准确度：±0.2℃、温度均匀性（孔间温度偏差）：±0.2℃，这些主要技术参数都达到了国际先进水平，可以与“PCR仪”美国ABI、美国伯乐和德国Eppendorf相比。 5． 附带功能选择：很多商家为了突出自己仪器的优点，把卖点指向仪器的附带功能上，市场上PCR仪主要参数都是满足实验要求，达到实验目的，很多用户把选择的标准方到了仪器的其他附带功能上。比如文件的存储量，不影响实验的使用效果一般梯度PCR仪在800个已经很大了。又比如升级荧光定量PCR仪，觉得没有这个必要，因为升级的没有专门做荧光定量的PCR仪性能那样的稳定和可靠。而且升级实时荧光定量PCR仪也是还要另外增加昂贵的升级费用才能用，再一个实时荧光定量PCR仪，每年都有新的产品，技术也在不短的更新。如果现在不用，将来用的话，还不如到用的时候才买。到时价格会更低。例子很简单：就如现在的手机一样，功能很多的，价格很贵，但是有好多功能都不用的，一年过后又有新性能的手机推出，原来贵的价格又变很低了。所以我建议购买PCR以时，进口以美国ABI的PCR仪（2720型PCR仪、Veriti 96孔梯度PCR仪，step one实时荧光定量PCR仪）为参考标准，功能简单，性能稳定，价格合理。购买国产的PCR仪以上海领成的PCR仪（TCG3型领成科研型PCR基因扩增仪、TCT3型领成梯度PCR仪、TC988C领成科研型实时荧光定量PCR仪）为参考标准，功能和性能可以和大多数进口相比。 四、安装调试及售后服务： PCR仪不再向几年前那么的奥秘，也并非想象中的那么难，现在的PCR仪已经普及化，已成为实验室常规的仪器设备。安装调试也非常的简单，特别是普通PCR仪，梯度PCR仪在仪器出厂前都经过严格的检测和调试好的，使用客户使用时只需接通电源就可以使用。很多客户担心仪器安装调试问题，于是宁愿花贵几千块钱，也要工程师上门安装调试，我觉得没有这个必要。包装箱里有使用说明书，如果使用过程中有什么问题一个电话就解决了，一个电话才几块钱，为什么要去多花几千块钱呢？而且PCR仪使用过程中只要您按照说明去操作，不要人为的用蛮力去摔打和用力去拧，一般是不会损坏的。所以客户在购买普通PCR仪和梯度PCR仪这类操作简单的仪器时无需工程师上门安装调试。他的使用和购买一台电视机使用一样的那么简单，没有必要去多花这几千块钱。维修及售后服务，仪器如果是出现什么异常的现象，可以给总部维修工程师或者是供方打电话，工程师可以根据你的描述指导你进行调试，如果无法调试的，在保修期内，非人为损坏的仪器的维修来回运费和维修费用由供货承担。就算是花高价和当地的代理商购买，仪器涉及到简单的调试他们会，但是严重损坏涉及到换零配件的，他们也是得递回总部来维修，因为只有总部维修配件和工具是集全的。 实时荧光定量PCR仪安装调试相对普通的PCR仪较为复杂，所以需工程师上门安装调试，安装调试费用也已经算在了仪器里面，客户购买后总部或者厂家的工程师会按照指定的时间上面安装调试。 五、结语：以上的推荐是结合多年来客户对PCR以使用情况和市场普及情况来进行分析总结的结果。 华东生物器材网（www.jp1718.com）是上海金鹏旗下网站。本网是专业的生化器材网站，集生产、制造、销售于一体。优势产品有紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、凝胶成像分析系统、低压液相色谱分离仪、自动部分收集器、梯度混合器、旋转蒸发器等生物仪器，是销售生化器材品种**，规模庞大的专业企业。 上海金鹏分析仪器有限公司 www.jp1718.com 电话： 61425398 36162366 手机： QQ:964122960，765695826， 842727501， 2460311703， 2431022418，170324176 传真： 地址：上海市真陈路1398弄15号 邮编：200444