**定量PCR技术（real-timeimmuno-PCR）是把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来，其本质是一种以PCR扩增一段DNA报告分子代替酶反应来放大抗原抗体结合率的一种改良型ELISA。
（1） real-time immuno-PCR的基本原理
real-timeimmuno-PCR主要由两个部分组成：
部分是类似于普通酶联**吸附实验（ELISA）的抗原抗体反应。
**部分即荧光定量PCR。
Real-time immuno-PCR与ELISA的区别就在于ELISA是以碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶来标记抗体，用颜色反应来表明阳性或阴性结果，而前者是以一段特定的双链或单链DNA来标记抗体，用PCR扩增抗体所连接的DNA，因此可由PCR产物的量来反映抗原分子的量。
由于荧光定量PCR的高灵敏度，只要存在着极微量的抗原抗体反应，都能被检测到。real-timeimmuno-PCR的关键之处就在于用一个连接分子将一段特定的DNA连接到抗体上，在抗原和DNA之间建立相对应关系，从而将对蛋白质的定量检测转变为对核酸的定量检测。
（2） real-time immuno-PCR体系的组成
**PCR体系由待检抗原，特异性抗体，连接分子，DNA和PCR扩增系统组成。
1．待检抗原：被检测的样品可以是抗原，或者是作为抗原的某种抗体。待检的抗原可以直接吸附于固相，这一过程与ELISA试验是相同的，因此有些吸附性差的抗原不能应用目前介绍的**PCR方法进行检测，需要对**PCR进行改进，以便能够检测吸附性差的抗原。**PCR的后续过程需PCR扩增，目前有些方法应用的固相板或管是专门用于**PCR，并且有些PCR仅可以直接用微量板进行扩增，这样可以简化实验过程和提高检测的性。**PCR具有非常高的敏感性，特别适用于检测微量抗原。
2．特异抗体：**PCR中的特异性是对应于待测抗原，与ELISA一样，抗体的特异性和亲和力将影响**PCR的特异性和敏感性。一般均选用单抗体，这个抗体常采用生物素标记，通过亲和素再结合DNA。
PCR是分子生物学领域的关键技术。温度的准确性对于PCR仪来说很重要。
影响PCR仪器温度控制性能主要有四种因素：
1.PCR仪器之间的差别对实验结果的影响：
没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低，就是同一模块不同的孔之间，温度有时也会不一样，相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是：当PCR仪的模块温度在升温时，温度过冲或不足，不能准确的达到预设的平台温度。
2.温度控制技术的差别对实验结果的影响：
使PCR仪模块的温度达到并保持在某一温度有很多方式。每一种方式都有优点和缺点。另外，这些技术被运用控制的水平对于温度控制的水准是很重要的，且有很大不同。大多数PCR仪器的温度控制性能是很差的。在单一或多传感器控制机制上的不同显而易见的引起了温度的不均一性。
3.仪器老化对实验结果的影响：
虽然PCR仪没有任何的机械或可移动部件，但是那并不意味着它不会磨损。电子器件的性能会随着时间的延长而老化，并由于过度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨损会引起模块的热斑或冷斑，通常PCR仪器不能识别这种由于机械磨损，模块延展和收缩效应引起的温控性能的不同。因此，为掌握这些情况，实时监测PCR仪的温度控制性能是重要的。出于同样的原因,PCR仪温控性能的失常通常是实验失败或毁坏循环反应的重要原因。
4.外部因素对实验结果的影响：
不同PCR仪与型号在温度控制性能上的不同直接影响了三种温度平台的温度的准确性和不均一性，因而影响了整个PCR反应的实验结果。另外，升温速度的不同，温度下降梯度的不均一性，温度过低，温度过冲，也是重要的因素。差的情况，一个本该阳性的结果却可能得出阴性的结果。对于实时PCR，荧光信号输出和产量/溶解曲线，直接与温度控制有关系，而这些结果很可能是戏剧性的。
5.实验室认证：
根据以上的论点，很多实验室已经不得不适应一些认证。和ISO、GMP、GLP标准一样，必须证明所有的实验室程序是按照标准程序所操作的。一些实验室只有当他们采用已经被他们的合作组织或专业委员会测试的或认可的程序时才可以称他们自己是合格的。