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原代细胞常见问题

发布时间:2015-08-25

1,细胞倍增数和细胞传代数有什么区别?
    
细胞倍增数指的是细胞培养过程中(多数情况下指的的是细胞的对数或者指数生长期)细胞总数的两倍增加。而细胞传代数指的是细胞从细胞培养瓶中移出后,传代或者再培养过程中的次数。传代培养的目的是使细胞处于低密度状态,刺激细胞的进一步生长。

2,收到冻存细胞后应该如何处理?
    
收到细胞后,立即把细胞从干冰中拿出来放到液氮中,细胞转移时间应尽可能地短,以防止冻存细胞的升温。不要把细胞放在-80℃下,这样可能那个会引起细胞的损伤。

3,冻存细胞如何复苏?
(1) 从液氮中取出一管细胞,注意保护好手和眼睛;
(2) 把盖子旋出螺旋口的1/4,10秒钟,去除可能残留在螺纹中的液氮,然后重新拧紧瓶盖。
(3) 立即把冻存管置于37℃的水浴槽中,轻轻地旋转,直至内置物完全融化。
(4) 溶化后,立即把冻存管从水浴槽中移出,擦干,转移至无菌环境中。
(5) 用70%的乙醇冲洗冻存管,然后拭去多余的乙醇;
(6) 打开冻存管盖。注意不要用手指碰触内部的螺纹。用1ml的移液管轻轻地把冻存管内的液体移出。
(7) 用1ml的移液管把冻存管中的液体移到多聚赖氨酸包被的器皿中,对于大多数的细胞类型,我们推荐使用T-75的细胞培养瓶,接种密度为5,000 cells/cm2
(8) 重新盖上盖子,轻轻地摇晃培养瓶,使细胞均匀分布,如果需要气体交换可以选松盖子。
(9) 把培养瓶置于37℃,5% CO2,95%空气的培养箱中孵育。
(10)铺板后的6-16个小时内更换培养基,以除去残余的DMSO和未贴壁的死亡细胞。

4,复苏的细胞**次铺板的时候,是否需要离心去除DMSO?
    
不推荐这样做。因为离心过程中对细胞的损伤要大于DMSO本身对细胞的毒性,尤其是高速离心的时候。在DMSO浓度十分低的情况下,DMSO对细胞毒性不会有太大影响。如果你把1 ml 冻存管中的细胞放在T-75的培养瓶中我们推荐加入15ml 的培养基,这样DMSO的浓度就低于了0.67%,我们发现这中条件下细胞没有太大影响。

5,培养基应多久更换一次?
    
一般来说每2-3天就应更换一次培养基,这还要取决于细胞生长的旺盛程度。大多数实验室每周一,周三,周五更换一次。
注意:细胞复苏后铺板后,**次更换培养基的时间应该是6-16个小时内,以去除残余的DMSO和死亡的细胞。

6,ScienCell 的人正常细胞是否能够扩增或者再次冰冻?
    
这要取决于细胞的类型,对于一些细胞如神经细胞、神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞不推荐扩增和再次冰冻。其他的细胞类型如纤维母细胞,星形细胞,肾系细胞,星形胶质细胞等可以扩增和再冰冻。但是需要注意的是再次冰冻的过程中可能会引起细胞生长性能的改变。如果您想再次

冰冻细胞,请咨询我们的技术人员并且使用ScienCell 专用的无血清细胞培养基以获得更好的结果。

7,如果把培养基冰冻保存是否可以保持更长时间?
    
不推荐冻存培养基,因为高营养成分的培养基冰冻可能会导致培养基组分的不可逆沉淀产生。

8,我培养瓶中应加多少体积的培养基?
    
推荐T-25培养瓶中加入5ml 的培养基,T-75培养瓶中加15ml, T-150中加30ml.

9, 使用ScienCell 的专用培养基时是否还需要加入其他的生长添加物?
    
不需要。ScienCell 专用培养基为每一种细胞类型而设计,已经在基础培养基里加入了细胞生长因子,***,FBS的成分,所以不需要额外的添加物。

10, 完全培养基的保存时间是多久?
    
如果完全培养基是4℃下保存,并且能够尽可能短地放在在室温或者37℃环境下,可以保存6周。

11,是否可以用其他品牌的培养基培养ScienCell的人类正常细胞?
    
推荐使用ScienCell 的培养基培养ScienCell的人类正常细胞。
ScienCell 的人的正常细胞都是在自己的完全培养基中培养并且测试的,细胞已经适应了这种环境,使用其他品牌的培养基培养ScienCell 的细胞可能会因为适应的过程得不到好的生长效果。

12,人类正常的细胞能够使用多少代?
    ScienCell 
不推荐使用代数来描述细胞的潜在生长能力。因为有的客户使用细胞的分流比。ScienCell 保证在使用ScienCell 细胞培养基和试剂培养的情况下,人类正常细胞能够达到15代的倍增数(说明中有其他备注的除外)

13,人类正常细胞中推荐的分流比是多少?
    ScienCell 
不推荐用分流比计算细胞浓度,因为胰酶处理细胞后,细胞的数量会发生变化。我们推荐胰酶处理细胞后通过细胞进行计数来计算细胞浓度,推荐的细胞接种密度为5,000-10,000/ cm2(对应产品的接种密度说明书里会有注释)

14,人类正常细胞可以进行细胞饥饿实验吗?
    ScienCell 
的细胞可以做饥饿实验,细胞在没有其他添加物的基础培养基中可以存活一段时间,但是细胞状态必须良好。过一段时间后实验必须终止,因为时间的延长会导致细胞的死亡。细胞在饥饿状态存活的时间与多种因素有关。

15,是否可以用质粒转染人类的正常细胞?
    ScienCell 
已经成功地转染了很多种细胞,比如:真皮成纤维细胞,肺成纤维祖细胞,真皮微血管内皮细胞等。
 

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