植物树叶总蛋白组织样品处理方法

植物树叶总蛋白组织样品处理方法

对多数从动物或植物组织里提取总蛋白质而言，同样没有一种通用的程序。但遵循的原则基本相同。下面列出两种提取植物树叶总蛋白程序：

裂解液制备：

（A）,7M Urea,2M Thiourea,4%(w/v)CHAPS,40mM Tris-Base,40mM DTT,2%Pharmalyte pH3-10.

（B）,905M Urea, 2%(w/v)CHAPS, 0.8%(w/v)Pharmalyte pH3-10,1%(w/v)DTT and 5mM Pefabloc proteinase inhibitor;

三氯醋酸-苯酮沉淀法提取植物树叶总蛋白程序：

（1）    先将植物树叶置于液氮中速冻，后放置于Gd200组织研磨仪中研碎；

（2）    悬浮于含10%三氯醋酸和0.07%β-巯基乙醇的丙酮溶液，-20℃冰浴；

（3）    让蛋白质沉淀过夜然后离心（4℃，40，000g,1h）,弃上清液；

（4）    重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的冰预冷丙酮溶液里；

（5）    离心（4℃，40，000g,1h）后真空干燥沉淀；

（6）    用（A）或（B）裂解溶液溶解沉淀，离心（4℃，40，000g,1h）；

（7）    Brandford法定量蛋白，然后分装保存在-78℃备用

超速离心法：

（1）    取材；

（2）    用Gd200组织研磨仪在液氮冷冻条件下将样品研成粉末，每1g样品加入0.5ml裂解液，使用Gd200高通量组织研磨仪研磨匀浆30s；

（3）    组织悬液15℃，10,000×g离心10min；

（4）    上清液4℃，150,000×g超速离心45min；

（5）    小心避开上层漂浮的脂质层，吸取离心上清6℃40,000g再次离心50min;