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叶绿素a、b含量测定过程全解析
叶绿素a、b含量测定过程全解析
已知叶绿素a、b的80%丙酮提取液在红光区的*大吸收峰分别为663nm和645nm,又知在波长663nm下,叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04和9.27,在波长645nm下分别为16.75和45.60,可根据加和性原则列出以下关系式:
D663 = 82.04Ca+9.27Cb (1)
D645 = 16.75Ca+45.60Cb (2)
式(1)、(2)中的D663和D645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的光密度,Ca、Cb分别为叶绿素a和b的浓度,以mg/L为单位。解方程组(1)、(2),得:
Ca = 12.72D663 – 2.59D645 (3)
Cb = 22.88D645 – 4.67D663 (4)
将Ca与Cb相加即得叶绿素总量(CT):
CT = Ca + Cb =20.29D645 + 8.05D663 (5)
另外,由于叶绿素a、b在652nm的吸收峰相交,两者有相同的比吸收系数(均为34.5),也可以在此波长下测定一次光密度(D652)而求出叶绿素a、b总量:
CT =(D652 × 1000)/ 34.5 (6)
在有叶绿素存在的条件下,用分光光度法可同时测定出溶液中类胡萝卜素的含量。
Lichtenthaler等对Arnon法进行了修正,提出了80%丙酮提取液中三种色素含量的计算公式:
Ca = 12.21D663 – 2.81D646 (7)
Cb = 20.13D646 – 5.03D663 (8)
Cx·c=(1000D470 – 3.27Ca – 104Cb)/ 229 (9)
式中:Ca、Cb分别为叶绿素a和b的浓度;Cx·C为类胡萝卜素的总浓度;D663、D646和D470分别为叶绿体色素提取液在波长663nm、646nm和470nm下的光密度。
由于叶绿体色素在不同溶剂中的吸收光谱有差异,因此,在使用其他溶剂提取色素时,计算公式也有所不同。叶绿素a、b在96%乙醇中*大吸收峰的波长分别为665nm和649nm,类胡萝卜素为470nm,可据此列出以下关系式:
Ca = 13.95D665 – 6.88D649 (10)
Cb = 24.96D649 – 7.32D665 (11)
Cx·c=(1000D470 – 2.05Ca – 114.8Cb)/ 245 (12)
以上就是实验室测定叶绿素含量的全过程,是根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的光密度D与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即:D=kCL。这是其中的标准方法,当然,我们有时也会选择
叶绿素仪
来测定叶绿素含量,因为叶绿素测定仪快速、简便,而且其结果**度也很好,现在很多农业机构、大学、研究机构等,都纷纷置备
叶绿素测量仪
,用于叶绿素含量的快速测定。
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