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凯氏定氮仪法的原理以及测定中的注意要点

凯氏定氮仪法的原理以及测定中的注意要点
       蛋白质与细胞结构、酶、**、病毒、**、物质转运和遗传等密切相关，蛋白质的定量测定是生物化学和其他生物科学、食品检验、临床检验、**诊断和质量检验中*重要的工作。人每日都需要摄入一定量的蛋白质，以供自身的正常运行，蛋白质测定方法一般可分为间接方法和直接方法。间接方法是通过测定样品中蛋白质的含氮量进行推算蛋白质含量的方法而定氮仪法就是间接测定方法之一。直接方法则是根据蛋白质的物理和化学性质，直接测定蛋白质含量的方法。本文简单的分析一下凯氏定氮仪法。
       凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏和吸收、滴定3个过程。在催化剂作用下，试样用浓硫
酸消煮破坏有机物，使其中的蛋白质氮及其他有机氮转化为氨态氮，然后与硫酸结合生成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白质含量。该法关键环节有浓硫酸用量、催化剂选择、消化时间、氢氧化钠用量和硼酸吸收液指示剂选择等。
       样品在消化时加入浓硫酸的量必须过量，一是脱水作用，将样品中有机物脱水然后碳化成C;二是氧化作用，浓硫酸和硫酸钾、硫酸铜一同加热使温度达到400℃以上，碳还原硫酸生成SO2，而碳本身被氧化成CO2;三是分解作用，将蛋白质分解，SO2还原N生成NH+4，本身被氧化成SO3;四是吸收作用，生成的NH+4与浓硫酸反应生成(NH4)2SO4;五是生成的(NH4)2SO4保存在浓硫酸溶液中不至于损失。
       样品消化过程要加入催化剂，加入硫酸钾能够提高分解时溶液的温度，使溶液沸点由290℃提高到400℃,加入硫酸铜、氧化汞和硒粉则能促进试样的分解,缩短消化时间。
       样品消化过程中，消化液经过一系列改变*终转变为绿色透明状态，这种过程是碳化的有机物完全被氧化的变化，但决不表示样品中的氮素全部转变为NH+4。
       蒸馏过程中加入40%氢氧化钠溶液，用于中和样品消化后剩余的浓硫酸,并使(NH4)2SO4转化为NH4OH，经加热生成NH3逸出，被硼酸吸收。为使样品消化液中的(NH4)2SO4全部转化为NH4OH，40%氢氧化钠溶液必须过量加入，用量不够会造成测定结果偏低，用量过多则浪费试剂。
       硼酸吸收液中混合指示剂的组成和配方有数种，如溴甲酚绿-甲基红、甲基红-甲基蓝、甲烯蓝-甲基红等，但以0.5%溴甲酚绿乙醇溶液和0.1%甲基红乙醇溶液混合而成的混合指示剂变色比较敏感。指示剂与硼酸吸收液的比例通常使用1∶100或2∶100。

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