酶标仪检测饲料中黄曲霉B1方案-1 用途
快速、准确地定量检测谷物、食品、饲料中的黄曲霉**。
酶标仪检测饲料中黄曲霉B1方案-2 概要
黄曲霉**是谷类及其他农作物常见的霉变菌，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物。污染粮食、油料作物的种子，其中以花生、玉米*易被污染，另外在小麦、高粱、巴西坚果、豆类和大米等重要粮食中也经常被检出。
黄曲霉**的种类很多，主要有黄曲霉B1、B2、M1、G1，其中以黄曲霉**B1毒性*强，含量*高，是总黄曲霉**的重要组成部分。黄曲霉**热稳定性很高，一旦产生便难以除去。对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力*强，还能引起突变和导致畸形。与人的肝癌有密切关系，也能引起人的急性中毒死亡。
鉴于这种霉菌**的毒性，欧洲国家做出了相近的限量，对黄曲霉**B1的限量为2ppb，对黄曲霉**总量的限量为4ppb。
酶标仪检测饲料中黄曲霉B1方案-3 测定原理
黄曲霉**检测试剂盒是基于竞争酶联**吸附检测法，用甲醇/水溶液震荡萃取粉碎样品中的黄曲霉**，过滤水相萃取物，然后进行检测。加黄曲霉**的酶标记物到微孔中，再加标准或样品到对应的测试孔中，加入抗体后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未结合的黄曲霉**和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养10分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品吸光度值与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的黄曲霉**浓度。
酶标仪检测饲料中黄曲霉B1方案-4 提供的试剂
48孔包被有抗体的微孔板一块（Mircrotiler Plate）
6瓶黄曲霉**B1标准液（Aflatoxin B1），1ml/瓶
浓度为：0ppb，0.1ppb， 0.5ppb，1ppb，2.5ppb，5ppb
1瓶4ml酶标记物（Conjugate Solution）………蓝色标记
1瓶4ml黄曲霉B1抗体（Antibody Solution）…绿色标记
1瓶7ml显色液（Substrate Solution）……………棕色瓶
1瓶7ml停止液（Stop Solution）……………… 黄色标记
（1N盐酸，请小心取用）
酶标仪检测饲料中黄曲霉B1方案-5 需要的材料但盒中不提供
蒸馏水或去离子水
分析纯试剂：正己烷、三氯甲烷、甲醇
20-200μl微量移液器及配套吸头
玻璃器皿：三角瓶、烧杯、量筒、蒸发皿、滴管、分液漏斗、具塞试管、移液管等
定量滤纸、吸水纸等
感量0.01g的电子天平，小型粉碎机或碾钵
酶标仪（内置450nm滤光片）
计时器
6 操作者应注意事项
使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温20-25℃下进行温度平衡；试剂用完后立即将其放置回2-8℃冰箱内保存
试剂使用前摇匀
加样时要准确，直接加到小孔底部，不可有气泡，不可加到孔壁上
整个加样过程要快，保证前后反应时间一致，若样品数量超过20份，请用多道移液器操作
不要将微孔板暴露在空气中时间过久，避免酶标板变干，未用完的酶标板需与干燥剂一起密闭于自封带内，防止受潮且避光保存于2-8℃冰箱内
加样后要轻轻震摇整板，使反应液混匀
孵育时需避光
洗涤时要迅速，洗涤液不可溢出，以防交叉污染；每次洗涤要先用力甩干后再拍干，*后要擦干板底，以利于仪器检测
不同批次测试盒中的试剂不能混用
甲醇、正己烷、三氯甲烷等有机试剂易燃，请小心取用和保存
停止液含1N HCL，需小心取用
虽AFB1标准浓度很低，但是严格规范的实验操作不可忽视，凡接触到标样的器皿都要用5%次氯酸钠或漂白粉浸泡半天后清洗备用
标准物质及显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下
7 样品处理
实验准备：配制80%甲醇/水溶液（体积比80:20）
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