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鬼笔环肽的染色程序

发布时间:2018-07-12
   鬼笔环肽(phalloidin),是从一种剧毒磨菇(Amanita phalloides)中分离出来的一种多肽物质,属于毒伞肽类**,是一种强烈**。C35H48N8O11S。无色,细针状结晶。分子量788.87g/mol, 熔点281oC.
   0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇(也可用DMSO或无水乙醇溶解)配成贮存液,可在-20度避光的条件下长期保存,工作液的浓度为5ug/ml,由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。
   生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟;
   3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;
   加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟,夏季时间可以短一些,生理盐水PBS清洗细胞2次;
   DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;
   吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油),盖上盖玻片,荧光或共聚焦显微镜下观察。 

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