Cat#15204
DCFH-DA 活性氧ROS荧光探针
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订购信息
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存储条件
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货号： 15204 (25 mg)
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保持在-20°C并干燥
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物理化学特性
分子量：487.29
溶剂：DMSO
光谱特性：激发=504，发射=529
生物应用
2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（也称为2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯）被细胞酯酶水解成2'，7'-二氯二氢荧光素（也称为2'，7'-二氯荧光素），然后被氧化成2。 '，7'-二氯荧光素主要由H2O2组成。 2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯可能在细胞内氧化剂应激期间对广泛的氧化反应具有反应性。 该探针广泛用于监测细胞氧化还原过程。
染色细胞的样本方案
以下过程提供了一般准则，请根据您的特定应用进行修改
1. 制备1-10mM DMSO储备溶液。应将未使用的DMSO储备溶液等分到单次使用的小瓶中避光并储存在-20°C。
2. 在生理缓冲液（如PBS，HBSS，HEPES）中使染料的工作浓度为1-10μM。根据经验确定工作浓度。
3. 从生长培养基中取出细胞，将染料工作溶液（来自步骤2）添加到细胞中，并在室温或37 ℃下培养细胞5到60分钟。
4. 去除染料工作溶液; 用预热的HBSS洗涤，加入预热的HBSS或生长培养基，在适宜温度下培养。 恢复时间可以广泛变化，因为一些细胞类型通常表现出低水平的酯酶活性。
5. 在将细胞暴露于实验诱导物之前，确定负载细胞样品的基线荧光强度。
6. 阴性对照如下：
6.1检查未染色的细胞在绿色发射范围内的自发荧光。
6.2对于流式细胞术，确定在染料加载和处理后细胞的正向和侧向散射不变。细胞尺寸的变化可能与处理或毒性反应引起的起泡或收缩有关。
6.3在没有诱导剂的情况下检查染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物的荧光。在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，荧光随时间的逐渐增加可能与自发水解，大气氧化或光诱导的氧化。
6.4检查已经保持在生长培养基或简单缓冲液中的未处理（对照）负载细胞的荧光。在健康细胞中，氧自由基被细胞酶或天然抗氧化剂消除。在染料加载恢复期后，健康细胞应表现出低水平的荧光，在实验期间相对稳定; 然而，可以观察到荧光逐渐增加（由于自动氧化）或减少（由于细胞中的染料损失或光漂白）。 在没有任何刺激或诱导的情况下，健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。
7.可以用H 2 O 2或叔丁基过氧化氢（TBHP）刺激阳性对照至终浓度~100μM（基于细胞的敏感性和反应增加或减少剂量）。
参考文献
1. Diaz G, Liu S, Isola R, Diana A, Falchi AM. (2003) Mitochondrial localization of reactive oxygen species by dihydrofluorescein probes. Histochem Cell Biol, 120, 319.
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4. Schilling E, Dopke HH. (1978) A rapid diagnostic test for the viability of early cattle and rabbit embryos using diacetyl-fluorescin. Naturwissenschaften, 65, 658.
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