Cat#22844
Cell Meter™TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
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订购信息
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储存条件
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仪器平台
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产品编号：22844（50种分析）
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保存在冰箱中并避免光照
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荧光显微镜，流式细胞仪和荧光酶标仪
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产品介绍：
DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。细胞凋亡中的DNA片段化可通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）检测细胞。TUNEL试验依赖于DNA中缺口的存在，这可以通过TdT鉴定，TdT是一种酶催化添加用标记二次标记的dUTP。所有现有的TUNEL分析都包含高毒性的二甲胂酸钠，它可能诱导细胞凋亡，还可以减少DNA的产生和DNA链。我们的Cell Meter™TUNEL细胞凋亡检测试剂盒使用不含二甲胂酸钠的专有缓冲系统。该试剂盒基于Tunnelyte™Green的掺入，绿色荧光染料改性的脱氧尿苷5' - 在凋亡过程中形成的DNA片段的3'OH末端的三磷酸。该试验针对该试验进行了优化在不使用抗体的情况下直接检测分离的或附着的细胞中的细胞凋亡。该试剂盒提供所有必需组件和优化的分析方案。它适合荧光酶标仪，荧光显微镜或流式细胞仪。可以使用FITC检测其信号滤光片组或Ex / Em = 490nm / 520nm。
试剂盒套件：
分析方案：
简要概述
1、用测试化合物制备细胞®
2、用4％甲醛固定细胞®
3、用反应混合物培养
4、在37°C下培养1小时®
5、在Ex / Em = 490/520 nm处洗涤并分析细胞
操作步骤
1.根据您的特定方案将细胞培养至*佳密度以诱导细胞凋亡。 我们对于在96孔微孔板培养物中生长的粘附细胞，推荐约30,000至50,000个细胞/孔约1至2 x 106非粘附细胞的细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，用与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。注意：我们用100nM-1μM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时以诱导细胞凋亡。
2.固定和透化
A,去除细胞培养基。
B,向每个孔中加入100μL/孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。
注意：对于非贴壁细胞，添加所需的量（例如2 x 106细胞/ mL）4％甲醛固定剂缓冲
C,在室温下培养平板20至30分钟。
D,去除固定剂。
可选：如果需要，在固定后加入100μL/孔/ 96孔板的透化试剂（0.2％Triton X-100在PBS中，未提供），并在室温下培养10分钟即 用PBS洗涤细胞2-3次。
可选：您也可以通过消化细胞使用DNAase I制备TUNEL反应的阳性对照，用DNA酶I在室温下保持30分钟，然后进行TUNEL反应（步骤3）
3. TUNEL反应
A,在使用前根据待测样品的数量准备反应混合物：
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定*佳细胞密度。
B，向每个样品中加入50μL反应混合物（来自步骤3.1），并在37℃下培养60分钟。
C，除去反应混合物，用200μL/孔的PBS洗涤细胞3-5次。
4.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光微孔板监测荧光强度，读数在Ex / Em = 490/520 nm。
5.可选：用1X Hoechst（组分C，Ex / Em = 350 / 460nm）染色细胞核用于图像分析。
数据分析：
